| 公开(公告)号 | CN1304561C |
| 公开(公告)日 | 2007.03.14 |
| 申请(专利)号 | CN200410081264.0 |
| 申请日期 | 2004.11.13 |
| 专利名称 | 一种提高红豆杉内生真菌发酵物中紫杉醇产率的方法 |
| 主分类号 | C12N1/14(2006.01)I |
| 分类号 | C12N1/14(2006.01)I;C12P17/02(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 西南师范大学 |
| 发明(设计)人 | 谈 锋;胡 凯;祝顺琴;唐克轩;廖志华 |
| 地址 | 400715重庆市北碚区西南师范大学 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 重庆华科专利事务所 |
| 代理人 | 康海燕 |
| 国省代码 | 重庆;85 |
| 主权项 | 一种提高红豆杉内生真菌发酵物中紫杉醇产率的方法，其特征在于：将茎叶核菌属的产紫杉醇内生真菌(Ectostroma sp.Fr.)XT5与束丝菌属的产紫杉醇合成前体10-去乙酰巴卡亭III和巴卡亭III的内生真菌(Ozonium sp.Lk.exFr.)XT1的培养物进行混合培养，提高发酵物中紫杉醇的产率，步骤如下： (1)培养基制备 ①PDA培养基： ②发酵培养基： 葡萄糖2-10g/L 蔗糖10-20g/L 蛋白胨0.5-2.5g/L 醋酸钠0.5-3g/L MgSO42-5mg/L Ca(NO3)25-100mg/L CuSO40.5-300mg/L ZnSO40.5-200mg/L MnCl21-25mg/L FeCl30.5-10mg/L KH2PO410-350mg/L 维生素B10.5-10mg/L 维生素B60.5-30mg/L 苯丙氨酸0.5-5mg/L 苯甲酸钠50-1000mg/L 乙酰水杨酸钠0.01-5mg/L 甲醇5-20ml/L 油酸1-10ml/L，pH 6.8； (2)菌体预培养；分别挑取束丝菌属的产紫杉醇合成前体10-去乙酰巴卡亭III和巴卡亭III的内生真菌XT1和茎叶核菌属的产紫杉醇内生真菌XT5的菌丝接种于含50ml PDA培养基的发酵瓶中，培养形成种子发酵液； (3)菌体生长培养：分别将上述两种真菌的种子发酵液接种于含500ml发酵培养基的摇瓶中，培养得到含菌体和培养液的真菌菌液； (4)将上述两种发酵物，即真菌菌液进行混合培养生产紫杉醇：将生长好的XT5菌液与XT1菌液按1∶0.5～4.0的体积份数比混合，补加总体积的0.5-1.0倍的发酵培养基培养； (5)紫杉醇提取：将上述发酵物4000rpm离心15min，上清液和低温冻溶的菌体加等体积的乙酸乙酯超声波萃取1h，重复提取2次；合并所有乙酸乙酯层，于50℃旋转蒸干，甲醇洗涤，加入二氯甲烷和水1∶1v/v萃取后，将二氯甲烷蒸干，准确量取1ml乙醇溶解得到紫杉醇样品； (6)含量检测：紫杉醇样品过滤后上高效液相色谱柱，于228nm做定性及定量检测。 |
| 摘要 | 一种提高红豆杉内生真菌发酵物中紫杉醇产率的方法，本方法利用产紫杉醇内生真菌与产紫杉醇合成前体10-去乙酰巴卡亭III和巴卡亭III分别单独培养，然后将培养物进行混合培养，并适当补加培养基，大幅度提高发酵物中紫杉醇的产率。本方法的优点在于利用两种同类真菌代谢途径互补大幅提高发酵物中紫杉醇的含量，大大高于产紫杉醇内生真菌单独培养的产率水平。使利用内生真菌进行工业化发酵培养生产紫杉醇成为可能。本方法不但适用于产紫杉醇内生真菌与产紫杉醇合成前体的内生真菌混合培养，提高培养物中紫杉醇含量。也适宜于产生天然有用成分的内生真菌与产生天然有用成分合成前体的内生真菌混合培养，提高培养物中天然有用成分的含量。 |
| 国际公布 |
