| 公开(公告)号 | CN1303219C |
| 公开(公告)日 | 2007.03.07 |
| 申请(专利)号 | CN200510016681.1 |
| 申请日期 | 2005.04.05 |
| 专利名称 | 腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制剂筛选模型的制备方法 |
| 主分类号 | C12Q1/34(2006.01)I |
| 分类号 | C12Q1/34(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 发明(设计)人 | 张晓宇;杨晓达;倪嘉缵 |
| 地址 | 130022吉林省长春市人民大街5625号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 吉林;22 |
| 主权项 | 一种腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制剂筛选模型的制备方法，其特征在于： 固定腺苷同型半胱氨酸水解酶，反应在0-10℃进行，所用试剂在0-10℃预冷； 1)偶联：取活化载体，离心，弃上清，用1mmol·L-1盐酸和pH＝7.4磷酸缓冲液或Tris-盐酸缓冲液各洗涤3-5次，加入一定量的腺苷同型半胱氨酸水解酶，混匀，50-200rpm振荡4-8小时，反应完毕后，离心，上清与封闭步骤中所得到的封闭液和洗涤液合并，用于测定蛋白浓度，固定化酶的蛋白浓度＝加入的蛋白总浓度-合并液中的蛋白浓度； 2)封闭：得到的沉淀用10-100mmol·L-1 pH 7.0-7.4的Tris-HCl缓冲液封闭过夜，离心，用10-100mmol·L-1 pH 8.0-8.5的Tris-HCl-NaCl和1-10mmol·L-1 pH 4-5的HAc-NaAc两种缓冲溶液轮流洗涤3-5次，收集封闭液和洗涤液； 3)活化：加入含有辅酶的磷酸缓冲液进行活化，室温放置1小时，再用pH 7.0-7.4的10mmol·L-1磷酸缓冲液洗涤至上清280、340nm吸收值稳定。 |
| 摘要 | 本发明属于一种酶抑制剂的筛选模型。腺苷同型半胱氨酸水解酶是一个抗炎、抗病毒、抗肿瘤、治疗心脑血管疾病的重要靶酶。调节酶的活性能治疗相关疾病，本发明旨在寻找合适的抑制剂，以求发现有价值的新药，应用腺苷同型半胱氨酸水解酶和活化的琼脂糖凝胶为基本原料，通过偶联方法，得到固定化酶，添加氧化型辅酶I(NAD+)，以保证酶的活性。该酶抑制剂的高通量筛选，特别适用于对有色化合物和复杂成分如中药和天然提取物的筛选。固定化酶的活性比未固定的腺苷同型半胱氨酸水解酶的活性略降低，但较普通的酶稳定，可重复利用。 |
| 国际公布 |
