| 公开(公告)号 | CN1301264C |
| 公开(公告)日 | 2007.02.21 |
| 申请(专利)号 | CN200510000032.2 |
| 申请日期 | 2005.01.05 |
| 专利名称 | 海洋生物抗氧化活性肽及其制备方法 |
| 主分类号 | C07K7/06(2006.01)I |
| 分类号 | C07K7/06(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 发明(设计)人 | 王跃军;孙 谧;邹 建;王海英 |
| 地址 | 266071山东省青岛市南京路106号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京金信立方知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 史和初 |
| 国省代码 | 山东;37 |
| 主权项 | 一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法，包括 (1)抗氧化活性蛋白的制备： ①将贝类内脏团绞碎，然后按湿重1∶1(w/w)加入含0.2％Triton-100；0.1mmol/L EDTA的1.0％的NaCl溶液置组织匀浆器中制成匀浆； ②调pH为5.6，70℃水浴加热5min，迅速冷却，冷却液经离心10min，收集上清液，调pH至6.7后收取60～90％饱和度的(NH4)2SO4沉淀，沉淀用5mmol/L pH 7.5的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液溶解、透析； ③将离心透析液取上清液，加入1.5倍预冷丙酮，将丙酮沉淀物再溶解于5mmol/L pH 7.5的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液中并充分透析得粗蛋白液； ④粗蛋白液经聚乙二醇20000浓缩、离心除不溶物，取上清液上DEAE-Sephadex A-50 20×400mm柱，先用5mmol/L pH 7.5的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液充分平衡，再用含0～0.2M氯化钠的上述缓冲液梯度洗脱，流速20ml/h，收集在280nm有吸收的馏份，合并具SOD活性的馏份，浓缩并用双蒸水充分透析、冻干保存； (2)抗氧化活性多肽制备 ①向抗氧化蛋白加入海洋低温碱性蛋白酶，蛋白质与酶重量比为33∶1.6，调pH为9.0，于30℃恒温水浴中酶解24小时，酶解结束后，将酶解液置于沸水浴中加热使酶失活，冷却，离心除去变性的大分子蛋白，取上清液冷冻干燥； ②酶解后粗品用去离子水溶解，经Sephadex G-25凝胶柱层析进一步去除大分子蛋白：用pH7.2三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液平衡后装18×1000mm柱，上样后用平衡缓冲液洗脱，流速为3ml/min，280nm处检测； (3)提纯 ①CM Sepharose阳离子交换柱层析： 阳离子交换剂CM Sepharose Fast Flow，经预处理后用pH3.0的2mM磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液平衡后装30×160mm柱，上样后用缓冲液洗脱到出现基线，再用含0～0.5M氯化钠的上述缓冲液梯度洗脱，收集活性峰； ②反相高效液相色谱(RP-HPLC) Waters 2690高效液相色谱系统，Symmetry C18分析型色谱5um，3.9×150mm柱，上样溶液为过膜去离子水，洗脱液为30％乙腈-水溶液，0％～100％洗脱液洗脱15ml，样品收集后真空冷冻干燥，得纯海洋生物抗氧化活性肽。 |
| 摘要 | 本发明涉及新型海洋生物抗氧化活性肽及其制备方法，该海洋生物抗氧化活性肽，其特征为一小分子量多肽类物质，分子量为794Da1；由7种氨基酸组成，分别为天冬氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸和赖氨酸，其物质的量之比为1∶1∶1∶1∶2∶1∶1。含有8个氨基酸残基。其中酸性氨基酸的相对含量为9.22％，碱性氨基酸的相对含量为12.62％，极性氨基酸的相对含量为44.8％。本发明提供的海洋生物抗氧化活性肽具有如下明显的优点：抗氧化活性强、水溶性好及安全、无毒、无副作用等，适宜应用于食品、化妆品、医药等领域。 |
| 国际公布 |
