| 公开(公告)号 | CN1884557A |
| 公开(公告)日 | 2006.12.27 |
| 申请(专利)号 | CN200610052151.7 |
| 申请日期 | 2006.06.27 |
| 专利名称 | 脂质体包裹弓形虫pGRA4真核表达质粒的方法及用途 |
| 主分类号 | C12N15/88(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/88(2006.01)I;C12N15/79(2006.01)I;C12N15/30(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 浙江大学 |
| 发明(设计)人 | 陈 睿;王金福 |
| 地址 | 310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 张法高;赵杭丽 |
| 国省代码 | 浙江;33 |
| 主权项 | 一种脂质体包裹弓形虫pGRA4真核表达质粒的方法，通过以下方案实现： (一)构建pcDNA3-致密颗粒蛋白4真核表达质粒： 从复苏的弓形虫RH株中提取DNA，并通过聚合酶链反应方法合成致密颗粒蛋白4基因片段后，分别用华美生物工程公司的KpnI和EcoRI双酶切经凝胶纯化的致密颗粒蛋白4基因片段和pcDNA3载体，经T4DNA连接酶处理后，连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α菌株，挑取转化菌单菌落培养后提取质粒，碱裂解法收集大量pcDNA3-致密颗粒蛋白4真核表达质粒，聚乙二醇沉淀法纯化pcDNA3-致密颗粒蛋白4真核表达质粒DNA；致密颗粒蛋白4基因扩增引物：5`-CGC GGG TAC CAT GCA GGG CAC TTG GTT TTC-3`和5`-CGC GGA ATTCTC ACT CTT TGC GCA TTC TTT-3`， (二)通过改进的脱水-再水化法构建脂质体，并包裹弓形虫pcDNA3-致密颗粒蛋白4真核表达质粒： 将磷脂酰胆碱、1，2-二油酰氧丙基-N，N，N-三甲基溴化铵、二油酰磷脂酰乙醇胺按16∶8∶4混合，溶于氯仿，旋转蒸发至氯仿完全蒸干后，加入1ml含100mgpcDNA3-致密颗粒蛋白4真核表达质粒的磷酸盐缓冲液，4℃振荡3小时使之完全混溶，冷冻干燥24小时后可见一块状白色多孔固体，使用时再加入1ml含50mg pcDNA3-致密颗粒蛋白4真核表达质粒的磷酸盐缓冲液水化。 |
| 摘要 | 本发明提供一种脂质体包裹弓形虫pGRA4真核表达质粒的方法，采用改进的脱水-再水化法制备脂质体，即在冷冻干燥过程之前和之后分别加入需包裹的真核表达质粒，可提高对真核表达质粒的包裹率，并且在使用前以冻干方式保存脂质体，使用时再水化，可提高构建脂质体的稳定性，减少构建的脂质体不稳定对包裹造成的影响。本发明提供的脂质体包裹弓形虫pGRA4真核表达质粒，有效的提高了小鼠的细胞免疫水平，可在制备提高动物免疫保护药物中应用。 |
| 国际公布 |
