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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:应用RNA酶保护法高通量筛选天然存在的正义-反义转录物专利检索:专利号/专利人/发明人
    

应用RNA酶保护法高通量筛选天然存在的正义-反义转录物

公开(公告)号 CN1876812A  
公开(公告)日 2006.12.13  
申请(专利)号 CN200510075065.3  
申请日期 2005.06.09  
专利名称 应用RNA酶保护法高通量筛选天然存在的正义-反义转录物  
主分类号 C12N15/09(2006.01)I  
分类号 C12N15/09(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国医学科学院基础医学研究所  
发明(设计)人 刘德培;柯细松;宫 环;陆 璐;屈 祎  
地址 100005北京市东城区东单三条5号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构  
代理人  
国省代码 北京;11  
主权项 本发明涉及一种高通量筛选细胞内真正的正义-反义转录物的新方法,实施步骤为: i. 提取组织总RNA。 ii. 用RNaseI处理总RNA。 iii. 证实残余的RNA是双链RNA(Double-stranded RNA,dsRNA)。 iv. 证实残余的RNA是细胞内源的RNA。 v. 把双链RNA变性为单链RNA。 vi. 把单链RNA逆转录为互补的DNA(Complement DNA,cDNA)。 vii. 在cDNA的3’端加上多聚A。 viii. 合成cDNA的第二条链。 ix. 制备双链DNA(Double-stranded DNA,dsDNA)的一个平端和一个粘端。 x. 把双链DNA克隆入克隆载体。 xi. 把重组载体转化如宿主细胞,构建总RNA中NSATs的cDNA文库。 xii. 对克隆进行序列测定。 xiii. 把克隆序列进行生物信息学分析。  
摘要 本发明涉及一种高通量筛选天然存在的正义-反义转录物(Naturalsense-antisense transcripts,NSATs)的新方法。本发明利用细胞内NSATs是双链RNA分子的特点,以及双链RNA分子能够免受单链RNA特异的RNase I的酶解作用,从而在RNase I酶解反应中保留下来的特性,建立了通过实验的手段来实现高通量筛选细胞内真正的NSATs的方法。利用这一方法,可以通过高通量筛选各种来源和状态的组织或细胞内真正的正义RNA-反义RNA复合物,理论上,通过该方法可以获得细胞内任何一个存在的NSATs。在鉴定RNA作用的靶向基因或筛选潜在的RNA药物时,本发明也有重要的应用价值。  
国际公布  
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