公开(公告)号
|
CN1289681C
|
公开(公告)日
|
2006.12.13
|
申请(专利)号
|
CN03117329.2
|
申请日期
|
2003.02.20
|
专利名称
|
乙型肝炎病毒siRNA表达载体的构建以及抗病毒治疗应用
|
主分类号
|
C12N15/86(2006.01)I
|
分类号
|
C12N15/86(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I
|
分案原申请号
|
|
优先权
|
|
申请(专利权)人
|
重庆医科大学
|
发明(设计)人
|
黄爱龙;唐 霓;张秉强;闫 歌
|
地址
|
400010重庆市渝中区医学院路1号
|
颁证日
|
|
国际申请
|
|
进入国家日期
|
|
专利代理机构
|
|
代理人
|
|
国省代码
|
重庆;85
|
主权项
|
一种用于构建靶向乙型肝炎病毒的小干扰性RNA分子的表达载体,其特征在于该表达载体含有下述三对序列中的一对: (1)上游序列:5’-TCGAGCTCCAGTTCAGGAACAGTATTCGTACTGTTCCTGAACTGGAGTTTTT-3’ 下游序列:5’-CTAGAAAAACTCCAGTTCAGGAACAGTACGAATACTGTTCCTGAACTGGAGC-3’ (2)上游序列:5’-TCGAGTCACCATACTGCACTCAGGTTCGCCTGAGTGCAGTATGGTGATTTTT-3’ 下游序列:5’-CTAGAAAAATCACCATACTGCACTCAGGCGAACCTGAGTGCAGTATGGTGAC-3’ (3)上游序列:5’-TCGAGGCCAAGTCTGTACAGCATCTTCGGATGCTGTACAGACTTGGCTTTTT-3’ 下游序列:5’-CTAG AAA GCCAAGTCTGTACAGCATCCGAAGATGCTGTACAGACTTGGCC-3’。
|
摘要
|
乙型肝炎病毒siRNA表达载体的构建以及抗病毒治疗应用,本发明属基因工程技术领域。本发明根据siRNA的设计原则,分别选择HBV包膜蛋白(MS)编码区69nt-87nt,聚合酶(P)编码区708nt-726nt,核心蛋白(C)编码区2052nt-2070nt的核苷酸序列,设计相应的siRNA序列,用BLAST软件进行同源分析证实为HBV高度保守序列后,化学合成单链寡核苷酸,体外经退火形成双链DNA,与真核表达载体pTZU6+1连接,酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了三种靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表达载体。上述表达载体通过阳离子脂质体介导与HBV真核表达载体pHBV共转染肝癌细胞HepG2后,采用免疫荧光和Abbott实验均证实HBV siRNA具有较强抑制病毒复制和表达的作用。
|
国际公布
|
|