公开(公告)号
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CN1287857C
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公开(公告)日
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2006.12.06
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申请(专利)号
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CN200410073124.9
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申请日期
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2004.09.29
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专利名称
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胃癌特异性纳米疫苗的制备方法
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主分类号
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A61K39/00(2006.01)I
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分类号
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A61K39/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国人民解放军第四军医大学
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发明(设计)人
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吴开春;师 瑞;吴道澄;宁小萱;丁 杰;樊代明
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地址
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710032陕西省西安市长乐西路17号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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西安通大专利代理有限责任公司
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代理人
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李郑建
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国省代码
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陕西;61
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主权项
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一种胃癌特异性纳米疫苗的制备方法,其特征在于,将人工合成的胃癌特异性抗原MG7模拟表位多肽和免疫佐剂CpG ODN 1645采用纳米乳剂包封,所述的胃癌特异性抗原MG7的氨基酸序列为Lys Pro His Val His Thr Lys,获得胃癌特异性纳米疫苗;具体包括以下步骤: 1)在2ml的双蒸水中分别加入0.4%重量的司盘-80、吐温-80;混合均匀得到水相A; 2)在另一加入8.0ml双蒸水的大试管中,先加入1.6ml的大豆油,然后各加入1.6mg的胃癌特异性抗原MG7模拟表位多肽和免疫佐剂CpG ODN1645,最后加入0.4%重量的司盘-80,混合均匀,得到油相B; 3)在3000转/分搅拌下,将油相B逐滴加入到水相A中,滴加完毕后将混合物移至真空高速剪切乳化机上,在0.7Kpa真空下,以23000转/分剪切40分钟,2次; 4)剪切后室温冷却20分钟,得到乳白色带乳光液体,冰浴下超声3分钟后再用膜过滤、除菌后4℃保存,即得到20nm-30nm的胃癌特异性纳米疫苗。
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摘要
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本发明公开了胃癌特异性纳米疫苗的制备方法。本发明利用生物性纳米乳剂作为体内药物运输载体,以胃癌特异性多肽抗原MG7为免疫抗原,以含有CpG基序的寡核甘酸(CpG ODN)为免疫佐剂,采用磁力超声法构建共包封有MG7-Ag模拟表位多肽与CpG ODN的纳米疫苗。经高效液相色谱分析,电镜观察以及离心等方法鉴定表明所构建的纳米疫苗粒径控制在20-30nm并具有较高的包封率和稳定性。疫苗免疫接种后,可诱导小鼠产生抗MG7-Ag特异性抗体以及一定数量的特异性CTL分泌IFNγ,抗原-佐剂共包封组优于单表位抗原单独包封组和其他对照组。肿瘤攻击后,共包封疫苗免疫组小鼠成瘤体积明显小于对照组。这一基因疫苗在胃癌的免疫治疗研究,胃癌特异性疫苗的研制方面将具有巨大的潜在价值。
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国际公布
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