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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:制备用于在大肠杆菌和昆虫细胞中表达鸭α-干扰素基因的方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

制备用于在大肠杆菌和昆虫细胞中表达鸭α-干扰素基因的方法

公开(公告)号 CN1861796A  
公开(公告)日 2006.11.15  
申请(专利)号 CN200510009978.5  
申请日期 2005.05.13  
专利名称 制备用于在大肠杆菌和昆虫细胞中表达鸭α-干扰素基因的方法  
主分类号 C12N15/70(2006.01)I  
分类号 C12N15/70(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/21(2006.01)I;C12N15/866(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 东北农业大学  
发明(设计)人 王君伟;任桂萍;许丽娜;李洪涛  
地址 150030黑龙江省哈尔滨市香坊区木林街59号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司  
代理人 祖玉清  
国省代码 黑龙江;23  
主权项 制备用于在大肠杆菌和昆虫细胞中表达鸭α-干扰素基因的方法,其特征是: (1)用淋巴细胞分离液分离鸭外周血单核细胞,植物血凝素诱导培养鸭外周血单核细胞,收获诱导培养的细胞,用Trizol试剂提取细胞总RNA; (2)设计扩增鸭α-干扰素基因的特异性引物,如下: 上游引物P1 20bp:5′-GCACAACCCAGGATCCACCA-3′,引入BamH I酶切位点; 下游引物P2 19bp:5′-GTGCGCGTGTGGGGTACCT-3′; (3)利用RT-PCR技术扩增鸭α-干扰素基因; (4)对鸭α-干扰素基因进行克隆、测序鉴定; (5)利用BamH I、Sal I这两个多克隆位点,将鸭α-干扰素基因定向亚克隆至原核表达载体pET30a和昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A上; (6)重组表达质粒pET30a-DuIFN-α转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS; (7)确定原核表达系统中表达鸭α-干扰素的最佳诱导时间和IPTG浓度; (8)鸭α-干扰素在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中的诱导表达; (9)重组表达质粒pBlueBacHis2A-DuIFN-α与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞Sf9细胞株; (10)噬斑分析筛选重组病毒; (11)确定真核表达系统中表达重组鸭α-干扰素的最佳表达时间和感染复数; (12)按最佳表达时间和MOI接种病毒,感染Sf9细胞,在Sf9细胞中表达鸭α-干扰素。  
摘要 本发明涉及制备用于在大肠杆菌和昆虫细胞中表达鸭α-干扰素基因的方法。包括编码鸭α-干扰素的基因的克隆,含鸭α-干扰素基因的原核表达载体和重组昆虫杆状病毒转染载体的构建,用所述含鸭α-干扰素基因的重组原核表达载体转化大肠杆菌和诱导表达,用所述含鸭α-干扰素基因的重组杆状病毒转染昆虫细胞及在昆虫细胞中的表达等。通过本方法制备的产品为研究鸭α-干扰素生物活性及其作用机理提供了基础,也可制备成抗病毒的药物。  
国际公布  
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