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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:蚓激酶干粉的制备方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

蚓激酶干粉的制备方法

公开(公告)号 CN1281743C  
公开(公告)日 2006.10.25  
申请(专利)号 CN200410039186.8  
申请日期 2004.02.20  
专利名称 蚓激酶干粉的制备方法  
主分类号 C12N9/64(2006.01)I  
分类号 C12N9/64(2006.01)I;A61K38/17(2006.01)I;A61P9/14(2006.01)I;A61P7/02(2006.01)I;A61P9/10(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 北京百奥药业有限责任公司  
发明(设计)人 万兴中  
地址 100080北京市海淀区中关村北一街3号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 北京泛华伟业知识产权代理有限公司  
代理人 王凤华  
国省代码 北京;11  
主权项 一种蚓激酶干粉的制备方法,包括如下步骤: 1)蚯蚓清洗:将活蚯蚓用水清洗后,按每公斤蚯蚓加入0.1~0.3公斤糖,或0.2~0.4公斤氯化钠,在室温下搅拌均匀,静置20~40分钟,然后用30~50℃的温水将蚯蚓身上的糖或氯化钠及污物洗去; 2)制浆:加入蚯蚓体积的1~8倍的水,用珠磨、胶体磨机或高压匀浆机将经步骤1)清洗过的蚯蚓进行细胞破碎,制成匀浆; 3)除渣:将步骤2)得到的匀浆通过过滤或离心除去其中的粗渣;所述的过滤是采用滤网孔径为5~20mm的不锈钢过滤器过滤; 4)澄清:经步骤3)除渣后的匀浆液,采用高速离心机或微孔膜过滤器处理2小时,得到澄清液; 5)分离:采用DEAE-阴离子交换层析柱或DEAE Affi Gel Blue三嗪染料亲和层析柱分离步骤4)得到的蚯蚓澄清液,用0.01~0.8M的酸盐溶液、磷酸盐溶液及0.01~1.8M的氯化钠溶液洗脱,收集活性峰部分的层析流出液; 6)浓缩脱盐:将步骤5)收集的层析液过滤以除去无机盐和小分子物质,脱去大部分水,使蛋白浓度达到20g/L,且浓缩液电导率≤0.15×103μs/cm时结束脱盐,得到除盐浓缩液;所述的过滤是采用标准截流分子量为0.5~50K的平板膜、卷式膜或中空纤维超滤装置进行的; 7)澄清过滤:采用孔径为0.45~2μm的深层微孔膜或折叠式膜微孔膜过滤装置,滤除步骤6)得到的除盐浓缩液中的悬浮颗粒,得到澄清液; 8)除菌:采用0.22μm的除菌滤膜过滤装置及辐照装置处理步骤7)的澄清液,除去菌体; 9)干燥:在无菌条件下将步骤8)除菌后的澄清液于-30~-40℃下冷冻8~12小时;然后在0.2mmHg的真空度下,升温至25~30℃,干燥10小时;继续升温至36~38℃,真空干燥14~15小时,得到蚓激酶干粉。  
摘要 本发明涉及一种蚓激酶干粉的制备方法,该方法包括如下步骤:将活蚯蚓用水清洗后,置于糖或氯化钠中,在室温下静置,刺激蚯蚓将其消化道内的分泌物吐尽;然后加入蚯蚓体积的1~8倍的水,进行细胞破碎,制成的匀浆经过除渣、澄清处理后,采用阴离子交换层析柱或亲和层析柱分离,收集活性峰部分的流出液,浓缩脱盐后再过滤、除菌;将得到的澄清液于-30~-40℃下冷冻;然后在真空下干燥,得到蚓激酶干粉,或是在无菌条件下将澄清液于喷雾干燥机内,经压缩空气雾化后脱水,得到蚓激酶干粉。该方法得到的蚓激酶干粉中有效组分含量高、质量易控、且易于大规模工业生产。  
国际公布  
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