| 公开(公告)号 | CN1274823C |
| 公开(公告)日 | 2006.09.13 |
| 申请(专利)号 | CN200410052292.X |
| 申请日期 | 2004.11.19 |
| 专利名称 | 一种人白细胞介素28B的生产方法及重组IL－28B工程菌 |
| 主分类号 | C12N15/09(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;C07K14/54(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 汕头大学医学院 |
| 发明(设计)人 | 何韶衡;李明才 |
| 地址 | 515031广东省汕头市新陵路22号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州粤高专利代理有限公司 |
| 代理人 | 陈 卫 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种人白细胞介素(IL)-28B的生产方法，其特征在于采用基因工程方法生产，所述基因工程方法包括如下步骤： (1)合成PCR引物，并在合成的引物中导入LIC粘性末端， 上游引物：5-GACGACGACAAGATTCCTGTCGCCAGGCTC-3 下游引物：3-GAGGAGAAGCCCGGTTTAGACACACAGGTCCCCGCT-5； (2)PCR扩增： 以pcDNA3.1/V5-His-TOPO-IL-28B质粒为模板，通过PCR基因扩增，获得IL-28B基因片段； (3)将上述PCR扩增得到的IL-28B基因片段与pET-44Ek/LIC载体连接，构建重组载体pET-44Ek/LIC-IL-28B； (4)将重组载体pET-44Ek/LIC-IL-28B转化细菌，构建重组IL-28B工程菌； (5)培养构建的重组IL-28B工程菌，诱导其表达生产IL-28B。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种人白细胞介素28B的生产方法及重组IL-28B工程菌。本发明包括人工合成引物；PCR扩增IL-28B成熟肽编码区；IL-28B原核表达载体pET44-IL-28B的构建；转化入大肠杆菌构建重组IL-28B工程菌；培养工程菌高效表达IL-28B；IL-28B的纯化。本发明由于采用不依赖连接反应的克隆方法(LIC)，准确、快速获得IL-28B基因的成熟肽编码区；使用大肠杆菌偏爱的终止密码子提高表达效率，表达量高，用S蛋白亲和层析柱一步纯化即可获得很纯的产品。IL-28B的制备，对临床用于治疗和预防感染性疾病及非感染性疾病具有重要的前景。 |
| 国际公布 |
