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一种人白细胞介素28B的生产方法及重组IL-28B工程菌

公开(公告)号 CN1274823C  
公开(公告)日 2006.09.13  
申请(专利)号 CN200410052292.X  
申请日期 2004.11.19  
专利名称 一种人白细胞介素28B的生产方法及重组IL-28B工程菌  
主分类号 C12N15/09(2006.01)I  
分类号 C12N15/09(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;C07K14/54(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 汕头大学医学院  
发明(设计)人 何韶衡;李明才  
地址 515031广东省汕头市新陵路22号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 广州粤高专利代理有限公司  
代理人 陈 卫  
国省代码 广东;44  
主权项 一种人白细胞介素(IL)-28B的生产方法,其特征在于采用基因工程方法生产,所述基因工程方法包括如下步骤: (1)合成PCR引物,并在合成的引物中导入LIC粘性末端, 上游引物:5-GACGACGACAAGATTCCTGTCGCCAGGCTC-3 下游引物:3-GAGGAGAAGCCCGGTTTAGACACACAGGTCCCCGCT-5; (2)PCR扩增: 以pcDNA3.1/V5-His-TOPO-IL-28B质粒为模板,通过PCR基因扩增,获得IL-28B基因片段; (3)将上述PCR扩增得到的IL-28B基因片段与pET-44Ek/LIC载体连接,构建重组载体pET-44Ek/LIC-IL-28B; (4)将重组载体pET-44Ek/LIC-IL-28B转化细菌,构建重组IL-28B工程菌; (5)培养构建的重组IL-28B工程菌,诱导其表达生产IL-28B。  
摘要 本发明公开了一种人白细胞介素28B的生产方法及重组IL-28B工程菌。本发明包括人工合成引物;PCR扩增IL-28B成熟肽编码区;IL-28B原核表达载体pET44-IL-28B的构建;转化入大肠杆菌构建重组IL-28B工程菌;培养工程菌高效表达IL-28B;IL-28B的纯化。本发明由于采用不依赖连接反应的克隆方法(LIC),准确、快速获得IL-28B基因的成熟肽编码区;使用大肠杆菌偏爱的终止密码子提高表达效率,表达量高,用S蛋白亲和层析柱一步纯化即可获得很纯的产品。IL-28B的制备,对临床用于治疗和预防感染性疾病及非感染性疾病具有重要的前景。  
国际公布  
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