| 公开(公告)号 | CN1268761C |
| 公开(公告)日 | 2006.08.09 |
| 申请(专利)号 | CN02136716.7 |
| 申请日期 | 2002.08.29 |
| 专利名称 | 一种制备人载脂蛋白基因重组蛋白的方法 |
| 主分类号 | C12P21/02(2006.01)I |
| 分类号 | C12P21/02(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 上海凯曼生物科技有限公司 |
| 发明(设计)人 | 周鸣南;龚邦强 |
| 地址 | 200233上海市田林路219号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 上海开祺知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 费开逵 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种人载脂蛋白ApoAIMilano的制备方法，其特征在于 1-1、采用RT-PCR技术从人肝细胞中获得人载脂蛋白基因片段； 1-2、通过PCR直接位点突变的方法制得人载脂蛋白基因； 1-3、采用PCR方法制备上述的两段基因片段β-B，A-II亚克隆到pMD-T载体上，进行DNA序列测定，然后从pMD-T载体上切下，克隆到含有Tac启动子，LacI抑制蛋白基因、t0转录终止子和Ampr青霉素抗性筛选基因、coLEI复制序列的表达载体pMZG上，再用SphI，HindIII限制性内切酶消化后，按β-B(500bp)A-II(250bp)SphI＿SalISalI＿HindIIIpMZG(3400bp)SphI＿HindIII进行拼装连接，构建重组表达质粒pMZG-3，将此构建的表达人载脂蛋白重组质粒转化进入宿主菌大肠杆菌内，组建成工程菌； 1-4、表达工程菌发酵、发酵液处理、纯化，得人载脂蛋白； 1-5、纯化的人载脂蛋白用谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽处理，形成人载脂蛋白的二聚体肽。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种人载脂蛋白ApoAIMilano二聚体肽的制备方法，它采用基因重组技术将人的ApoAIMilano基因克隆到表达载体上，构建成表达重组质粒，并转化进入大肠杆菌，组建成表达工程菌，经发酵、纯化工艺获得人ApoAIMilano蛋白，它可用于治疗急性动脉粥样硬化斑块形成而导致的心绞痛、心肌梗死等冠状动脉综合症。 |
| 国际公布 |
