公开(公告)号
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CN1814800A
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公开(公告)日
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2006.08.09
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申请(专利)号
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CN200510090185.0
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申请日期
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2005.12.16
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专利名称
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一种用于制备HIV-1病毒载量测定外参照的质粒及其应用
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主分类号
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C12Q1/68(2006.01)I
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分类号
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C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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李卫云;李燕琴
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发明(设计)人
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任若通;贲昆龙;李卫云;陈 韵;陈震球;陶 剑
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地址
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510623广东省广州市珠江新城南天广场皇朝阁1005
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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广东;44
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主权项
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一种用于制备HIV-1病毒测定的RNA外参照的重组质粒载体,其包含用引物F/R以HIV-1基因组RNA为模板反转录扩增而获得的核酸片段,其中所述引物F/R序列如下: F:5’-CGACTCATGGAGCATCCTGCCTAAG-3’, R:5’-ACAGCGGTCACTTGACGAGTAATCACTAGC-3’。
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摘要
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本发明涉及一种用于制备HIV-1病毒量测定用外参照的质粒,建立HIV-1感染者和艾滋病人血浆中HIV病毒量定量测定用外参照的方法以及该外参照在HIV病毒量测定中的应用。其制备方法为:利用HIV外围引物HF/HR从HIV-1IIIB病毒的RNA经反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)得到的HIV-1cDNA片断,克隆到载体以构建含有HIV-1cDNA片断的pZhcT-550重组质粒,转化至大肠杆菌感受态细胞,经PCR鉴定,筛选出阳性克隆子,获得大量重组质粒pZhcT-550。体外转录重组质粒pZhcT-550,获得供HIV病毒载量定量测定使用的RNA外参照,然后在荧光定量PCR仪上通过HIV LUX引物的配合使用,建立了HIV感染者和艾滋病患者血浆中HIV病毒载量的定量测定方法。本发明操作简单,价格便宜,特异性好,灵敏度高,并有较好的可重复性,将为艾滋病的科学研究与防治提供有力工具。
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国际公布
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