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公开(公告)号
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CN1810954A
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公开(公告)日
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2006.08.02
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申请(专利)号
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CN200510112983.9
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申请日期
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2005.10.18
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专利名称
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一种利用大肠杆菌生产人α防御素1蛋白的方法
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主分类号
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C12N1/21(2006.01)I
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分类号
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C12N1/21(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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甘肃亚盛盐化工业集团有限责任公司
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发明(设计)人
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周长生;陈其新;李春丽;陈正华
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地址
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730030甘肃省兰州市城关区张掖路219号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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甘肃省专利服务中心
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代理人
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田玉兰;程 萍
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国省代码
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甘肃;62
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主权项
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一种利用大肠杆菌生产人α防御素1蛋白的方法，包括以下步骤： (1)使用SEQIDNO1所示的序列片段 1ATGGCCTGCTATTGCCGTATTCCAGCCTGC 31ATTGCAGGCGAACGTCGTTATGGCACCTGC 61ATCTACCAGGGCCGTCTCTGGGCATTCTGC 91TGCTGATAAG 下划线为起始密码子或双终止密码子及侧翼序列 (2)将上述基因序列插入T7型Trx融合表达载体中，获得重组质粒pET32a-mHNP1。 (3)将pET32a-mHNP1导入匹配大肠杆菌中组成完整表达体系； (4)用异丙基硫代-β-D半乳糖糖苷诱导上述体系在菌体内表达人HNP1成熟蛋白。
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摘要
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本发明提供了一种利用大肠杆菌生产生物活性物质人α防御素1蛋白的方法及其适用的优化设计DNA序列和重组表达质粒。包括：使用由人α防御素1成熟肽编码序列优化设计后获得的序列SEQ ID NO：1，构建成原核表达载体质粒pET32a-mHNP1，将质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，化学诱导表达人α-防御素1。本法可克服因α防御素1蛋白对宿主菌本身的毒害作用而引起的低表达甚至不表达，大量生产有活性的人α防御素1蛋白，满足有关结构、生化性质研究及抗体制备等方面的需要，也可应用于医药卫生领域。
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国际公布
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