网站首页
开云app安装不了怎么办
药师
护士
卫生资格
高级职称
住院医师
畜牧兽医
医学考研
医学论文
医学会议
开云app安装
网校
论坛
招聘
最新更新
网站地图
您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:乳腺癌转移中参与分化等作用基因的分离及分离方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

乳腺癌转移中参与分化等作用基因的分离及分离方法

公开(公告)号 CN1810987A  
公开(公告)日 2006.08.02  
申请(专利)号 CN200510013151.1  
申请日期 2005.01.28  
专利名称 乳腺癌转移中参与分化等作用基因的分离及分离方法  
主分类号 C12Q1/68(2006.01)I  
分类号 C12Q1/68(2006.01)I;C12P19/34(2006.01)I;C12N5/06(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 南开大学  
发明(设计)人 张晓东;叶丽虹;吴英;尤嘉琮;蔡 娜  
地址 300071天津市卫津路94号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 天津市学苑有限责任专利代理事务所  
代理人 郑 楠  
国省代码 天津;12  
主权项 一种乳腺癌转移中相关基因的分离方法,其特征在于包括: 1)用SCID(Severecombinedimmunodeficiency,SCID)从人乳腺癌细胞系MCF-7中筛选和建立具有高转移倾向的转移亚克隆LM-MCF-7细胞系; 2)细胞培养 将LM-MCF-7和MCF-7细胞用RPMI1640(含有10%FBS、100u/ml硫酸链霉素和100u/ml青霉素)培养液,在37℃、5%CO2条件下CO2培养箱中培养; 3)总RNA提取 一步法提取MCF-7和LM-MCF-7细胞的总RNA,用异丙醇沉淀,并过柱纯化; 4)cDNA反转录及荧光标记 取一定量总RNA,以T7-Oligo(dT)15为引物,合成双链cDNA,纯化;之后将双链cDNA进行体外转录合成cRNA、纯化;取cRNA,用SuperscriptII反转录酶(200u/μl),9个碱基的随机序列寡核苷酸引物反转录为cDNA并纯化;取cDNA,用9个碱基的随机序列寡核苷酸引物和KLENOW酶进行荧光标记,之后纯化并抽干;标记过程中dATP,dGTP,dTTP使用浓度为120μM,dCTP为60μM,Cy5-dCTP,Cy3-dCTP为40μM,dNTP为10mM; 5)制备人寡聚核苷酸标准基因芯片 将Qiagen公司人类基因的Oligo库中的寡聚DNA点制在一张75×25mm、经过化学修饰的载玻片上;点制在芯片上的样品还包括人的12个看家基因作为阳性对照,12条人工合成的与人基因没有同源性的70个碱基的寡聚DNA作为阴性对照,以及拟南芥的3个基因作为外标;整个点阵分成48个亚阵;每个亚阵有22行,22列;点间距为185μm,点的直径约为140μm; 6)杂交与洗涤 将标记的DNA溶于35μl杂交液中,放入标准基因芯片于42℃杂交过夜;杂交结束后,将芯片在42℃含有0.2%SDS和2×SSC的液体中洗5分钟,再在0.2×SSC中室温洗5分钟,最后甩干用于扫描; 杂交液的组份为:3×SSC,0.2%SDS,5×Denhart’s,25%甲酰胺; 7)筛选确定 用ScanArrayExpress双通道激光扫描仪扫描基因芯片,用GenePixPro4.0软件分析芯片上每个点Cy3和Cy5荧光信号的强度和比值,并用Lowess方法归一化;以差异为两倍(即比值大于2.0,小于0.5)的标准来确定差异表达基因。  
摘要 本发明公开了一种高精确度、高通量筛选在乳腺癌转移中参与分化、发育、信号转导和应激反应等作用基因的分离方法。本发明方法通过建立具有高转移倾向的转移亚克隆LM-MCF-7细胞系与其亲本人乳腺癌细胞系MCF-7形成配对细胞系作为实验样本,不仪可随时无限量培养获得,且由于实验样本的细胞成分均一,保证了分离结果的精确性和准确性。本发明方法还通过基因表达谱芯片技术分离出了这些相关的基因,这些基因的表达和功能的确认,在乳腺癌药物或基因治疗方面以及在用于制备肿瘤转移芯片、制备抗肿瘤转移基因疫苗及建立抗肿瘤转移药物筛选技术平台方面,都将有着重要的实际应用价值。  
国际公布  
...
评论加载中...
网 名: (必填项)
评论内容:
关于我们 - 联系我们 -版权申明 -诚聘英才 - 网站地图 - 医学论坛 - 医学博客 - 网络课程 - 帮助
医学全在线 版权所有© CopyRight 2006-2046,
浙ICP备12017320号-1
百度大联盟认证绿色会员可信网站 中网验证
Baidu
map