公开(公告)号
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CN1800215A
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公开(公告)日
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2006.07.12
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申请(专利)号
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CN200510032327.8
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申请日期
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2005.11.01
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专利名称
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一种预防和治疗日本血吸虫感染的相关基因和蛋白质及其用途
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主分类号
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C07K14/765(2006.01)I
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分类号
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C07K14/765(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/86(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/74(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61K38/38(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中南大学
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发明(设计)人
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胡维新;邬国军;秦志强
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地址
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410078湖南省长沙市开福区湘雅路110号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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湖南;43
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主权项
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东方田鼠血清白蛋白系利用亲和层析法、聚丙烯酰氨凝胶电泳、透析、冷冻干燥,从东方田鼠长江亚种和宁夏指名亚种血清中分离得到。东方田鼠白蛋白对在体外培养的日本血吸虫童虫有明显的杀灭作用,对在体内接种血吸虫尾蚴的小白鼠有明显的预防和治疗作用。 将成年东方田鼠用乙醚麻醉,眼框取血。血液收集于试管中,冰箱4℃过夜,使血液凝固。血液凝固后,3000转/每分钟,离心5分钟,收集血清。 东方田鼠血清用缓冲液I(0.05MKH2PO4,pH7.0)按1∶1稀释,经10000rpm离心去除不溶性物质后,上样于蓝色琼脂糖凝胶FF亲和层析柱顶部。层析柱用缓冲液I洗脱,以去除未结合蛋白质。随后用缓冲液II(0.05MKH2PO4,1.5MKCl,pH7.0)对血清白蛋白进行洗脱,收集洗脱液。透析袋(透析分子量8000~14000kDa)用缓冲液I透析平衡24小时(其间换液至少3次)。将含有血清白蛋白的洗脱液置于透析袋内,4℃对水充分透析去盐3天(其间换液至少6次),真空冷冻干燥。用12%SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳,对纯化的白蛋白进行纯度鉴定。
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摘要
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本发明公开了一种杀灭日本血吸虫童虫及预防、治疗日本血吸虫感染的蛋白质序列和相应基因序列及其用途。该蛋白质系利用亲和层析法、聚丙烯酰氨凝胶电泳、透析、冷冻干燥和蛋白质氨基端测序,从东方田鼠血清中分离得到血清白蛋白。利用聚合酶链式反应技术,获得东方田鼠血清白蛋白基因序列。将该基因以及修饰后的突变体插入真核表达载体,导入动物体内,可用于日本血吸虫感染的基因预防和治疗。可利用基因工程技术,生产东方田鼠血清白蛋白及其突变体,用于血吸虫病的预防和治疗。通过建立转基因动物,使疫区动物对日本血吸虫产生永久性抗性,阻断日本血吸虫的传播和血吸虫病的蔓延。
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国际公布
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