公开(公告)号
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CN1259337C
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公开(公告)日
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2006.06.14
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申请(专利)号
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CN02120821.2
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申请日期
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2002.06.04
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专利名称
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人甲状旁腺激素基因突变体合成、表达、制备及应用
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主分类号
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C07K14/635(2006.01)I
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分类号
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C07K14/635(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;A61K38/29(2006.01)I;A61P19/10(2006.01)I;A61P19/08(2006.01)I;A61P3/00(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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北京双鹭药业股份有限公司
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发明(设计)人
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徐明波;王勇波;崔铁民;李亚军;王红丽;袁雪莲;张 蕊
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地址
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100041北京市石景山区八大处高科技园区
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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北京;11
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主权项
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一种制备人甲状旁腺激素的方法,包括: (1)合成一条编码人甲状旁腺激素的基因,所述基因具有表1所示的核苷酸序列; (2)将(1)得到的基因序列克隆到原核表达载体中; (3)用(2)所述的表达载体转化原核细胞得到工程菌; (4)通过发酵技术扩增(3)中所得到的工程菌,得到人甲状旁腺激素的高水平表达。
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摘要
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本发明涉及一种重组人甲状旁腺激素(Parathyriod Hormone,简称PTH)的制备方法。本发明利用遗传密码的兼并性,设计了大肠杆菌偏爱的密码子,降低了DNA序列中的GC含量,合成了PTH的DNA序列。将PCR扩增的人PTH基因与原核表达载体如pET22b组装成高效表达质粒,转化大肠杆菌后用诱导剂诱导PTH基因表达,表达量达到菌体总蛋白的25-30%。工程菌经发酵扩增,破碎后保留上清。上清经处理后,进行离子交换层析和凝胶排阻层析二步法纯化产品。纯品加保护剂后制成药用冻干制剂。该制剂可用于由骨代谢病、骨质疏松所引起的各类疾病的治疗。
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国际公布
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