公开(公告)号
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CN100338223C
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公开(公告)日
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2007.09.19
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申请(专利)号
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CN02125767.1
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申请日期
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2002.08.16
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专利名称
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一种单链DNA快速制备技术及试剂盒
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主分类号
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C12P19/34(2006.01)I
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分类号
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C12P19/34(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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赵 翀
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发明(设计)人
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赵 翀
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地址
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100083北京市海淀区学院路丁11号西二楼408室
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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代理人
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国省代码
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北京;11
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主权项
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一种用于核酸的测序、反义寡核苷酸药物的合成、单链探针的制备以及SELEX分子文库的构建的单链核酸快速制备试剂盒,其特征在于它至少包括一管生物微粒,所述生物微粒是表面具有由环氧乙基、碘乙基、酰肼基、环化亚胺碳酸盐、氰酸酯和吖内酯组成的连接分子层的固相基质微粒;一套用于固/液相分离的分离装置;并含有下述所有成分:①至少有一管为DNA聚合酶或其酶活性的片段、基因重组产物或酶修饰物;②至少有一管为反转录酶;③至少有一管为核酸连接酶;④至少有一管为dNTP或rNTP,其中至少有一种成分为指示分子的标记物;⑤至少有一管为非固相寡核苷酸引物;⑥至少有一管为电泳样品缓冲液;⑦至少有一管为ddNTPs,其中有一种成分为指示分子的标记物;⑧至少有一管为DNA依赖的RNA聚合酶;⑨至少有一管为缓冲液。
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摘要
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本发明公开了一种单链DNA快速制备技术及试剂盒的制备方法。该技术快速、灵敏、纯度高,制备方法简便、成本低,适合各种规模不同核酸样品的DNA测序和探针制备。主要特征在于将一条引物通过固相合成或化学偶联等方法固定在固相基质微粒的表面获得固相引物,以靶核酸为模板在固相基质的表面进行固相PCR扩增,产物经加热变性,使DNA双链解链,而由固相引物延伸获得的DNA单链仍然保留在固相基质的表面;分离固/液相获得两条互补的DNA单链。运用本发明制备的单链DNA和RNA可用于核酸的测序,反义寡核苷酸药物的合成、单链探针的制备以及SELEX分子文库的构建等,可广泛地用于生物学、医药学、疾病预防、农牧业、食品与卫生、能源与化工、环境监测以及医学诊断与检测等领域。
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国际公布
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