| 公开(公告)号 | CN1250739C |
| 公开(公告)日 | 2006.04.12 |
| 申请(专利)号 | CN01120369.2 |
| 申请日期 | 2001.08.23 |
| 专利名称 | 低成瘾性镇痛药物高通量筛选平台 |
| 主分类号 | C12Q1/04(2006.01)I |
| 分类号 | C12Q1/04(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 |
| 发明(设计)人 | 段海清;张兆山 |
| 地址 | 100071北京市丰台区东大街20号国家生物医学分析中心 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京纪凯知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 关 畅 |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种低成瘾性镇痛药物的高通量筛选方法，包括以下步骤： 1)将无血清微载体培养的CHO衍生工程细胞株CHO-OPR8CGMCC№0613及CHO衍生工程细胞株CHO-PCGMCC№0612分别装入层析柱中，得到CHO-OPR8层析柱及CHO-P层析柱；所述微载体培养是在培养基中加入了2-20mg/ml的大孔径明胶微载体； 2)将待选择的5肽库和15肽库分别上样到CHO-OPR8层析柱，洗涤层析柱后采用洗脱液洗脱与CHO-OPR8特异结合的样品，将收集的洗脱液上样到CHO-P层析柱，收集穿过峰，得到第一轮筛选出的候选多肽； 3)将第一轮筛选出的候选多肽再上样到CHO-OPR8层析柱，将收集的洗脱液上样到CHO-P层析柱，收集穿过峰，得到第二轮筛选出的候选多肽； 4)将第二轮筛选出的候选多肽再上样到CHO-OPR8层析柱，将收集的洗脱液上样到CHO-P层析柱，收集穿过峰，得到第三轮筛选出的候选多肽； 5)将最后一轮筛选的噬菌体全部转染K91Kan，挑选阳性菌株进行接种培养，提取质粒，进行序列分析； 6)将复制型噬菌体质粒的序列分析结果与空载体的序列进行比较，寻找插入片段的核苷酸序列，推导出氨基酸序列，并将序列进行一级结构的比较和二级结构的分析，得到目的多肽。 |
| 摘要 | 本发明公开了一个低成瘾性镇痛药物高通量筛选平台。低成瘾性镇痛药物的高通量筛选方法包括以下步骤：1)将细胞株CHO-OPR8及CHO-PCGMCC分别装入层析柱中，得到CHO-OPR8层析柱及CHO-P层析柱；2)将待选择的5肽库和15肽库分别上样到CHO-OPR8层析柱，将收集的洗脱液上样到CHO-P层析柱，收集穿过峰，得到第一轮筛选出的候选多肽；3)第二轮洗涤；4)第三轮洗涤；5)将最后一轮筛选的噬菌体全部转染K91Kan，挑选阳性菌株进行接种培养，提取质粒，进行序列分析；6)将复制型噬菌体质粒的序列分析结果与空载体进行比较，寻找插入片段的核苷酸序列，推导出氨基酸序列，得到目的多肽。 |
| 国际公布 |
