| 公开(公告)号 | CN1249243C |
| 公开(公告)日 | 2006.04.05 |
| 申请(专利)号 | CN200310114614.4 |
| 申请日期 | 2003.12.18 |
| 专利名称 | 靶向肝癌AFP基因的siRNAs表达载体及其构建方法与用途 |
| 主分类号 | C12N15/63(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/63(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 济南市中心医院 |
| 发明(设计)人 | 汪运山;亓同钢 |
| 地址 | 250013山东省济南市解放路105号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 山东;37 |
| 主权项 | 靶向AFP基因的siRNAs表达载体，其特征是，以pSilencer3.0-H1为载体，由H1启动子启动针对AFP基因的发夹状双链RNA分子的表达，本载体质粒针对AFP基因编码区序列5′-AACTCAGTGAGGACAAACTAT-3′，是用于与AFP相关的肝细胞癌的治疗性物质，由以下方法制得： (1)RNA干涉靶序列的选择及插入模板的设计与合成 选择AFP基因编码区序列5′-AACTCAGTGAGGACAAACTAT-3′，设计并合成了两段互补的寡核苷酸序列，序列如下： 5’-gatcccgctcagtgaggacaaactatttcaagagaatagtttgtcctcactgagttttttggaaa-3’， 5’-agcttttccaa-aaaactcagtgaggacaaactattctcttgaaatagtttgtcctcactgagcgg-3’； (2)将上述合成的两段寡核苷酸与线性化的Psilencer3.0-H1的连接、转化、扩增及质粒的纯化 首先将合成的两段寡核苷酸等量混合，90℃3min，37℃孵育1h，然后将结合的双链寡核苷酸与带有BamH1和HindIII粘性末端的Psilencer3.0-H1质粒连接，，最后，将连接成功的质粒转化DH5a大肠杆菌，经氨苄青霉素筛选，挑选耐药菌落大量培养，质粒的提取及纯化采用经典的碱裂解法和聚乙二醇质粒纯化法； (3)质粒的鉴定 DNA琼脂糖凝胶电泳，及应用M13的通用测序引物进行测序，以确定合成的寡核苷酸是否已经转入pSilencer3.0-H1质粒中及是否有碱基异常存在。 |
| 摘要 | 靶向肝癌AFP基因的siRNAs表达载体及其构建方法与用途，属于生物医药技术领域。以pSilencer3.0-H1为载体，由H1启动子启动针对AFP基因的发夹状双链RNA分子的表达，本载体质粒针对AFP基因编码区序列5′-AACTCAGTGAGGACAAACTAT-3′，是用于与AFP相关的肝细胞癌的治疗性物质。靶向AFP基因的siRNAs表达载体用于制备分泌AFP蛋白的肝癌的基因治疗药物。 |
| 国际公布 |
