| 公开(公告)号 | CN1749274A |
| 公开(公告)日 | 2006.03.22 |
| 申请(专利)号 | CN200510080478.0 |
| 申请日期 | 2005.07.05 |
| 专利名称 | 一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法 |
| 主分类号 | C07K14/56(2006.01)I |
| 分类号 | C07K14/56(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 北京凯因生物技术有限公司 |
| 发明(设计)人 | 张春丽 |
| 地址 | 100176北京市经济技术开发区荣京东街6号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | |
| 代理人 | |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法，其包括下述步骤： (1)破碎发酵完毕的重组人干扰素α2b大肠杆菌工程菌，离心得沉淀； (2)将沉淀按1∶5-20(重量/体积)比例加入4M尿素/TE溶液，离心得沉淀； (3)将沉淀按1∶5-25(重量/体积)比例加入Tris-HCl溶液，离心得沉淀； (4)将沉淀按1∶2-10(重量/体积)加入8M盐酸胍+DTT裂解液，离心，取上清液，测蛋白含量； (5)将上清液倒入H3BO3溶液中搅拌均匀，稀释后的溶液蛋白含量为0.15-0.08mg/ml，复性，得复性液； (6)向复性液中缓慢滴加6MHCl，调PH2.0-3.0，离心，收集上清液，缓慢滴加6MNaOH(体积/体积)，调PH7.8-8.0； (7)将硫酸铵粉末缓慢加入上清液中，溶解后过滤，取滤液； (8)依次进行疏水柱M1柱层析、CM-Sepharose柱层析、疏水柱M2柱层析和S-100分子筛层析。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法，其包括下述步骤：破碎重组人干扰素α2b大肠杆菌工程菌，尿素溶解，Tris-HCl洗涤，盐酸胍裂解，硼酸复性，调pH值，盐溶，疏水柱M 1柱层析，CM-Sepharose柱层析，疏水柱M2柱层析和S-100分子筛层析。本方法减少了纯化步骤，进行纯化过程的集成，使工艺流程顺畅，无迂回，生产配置无瓶颈，为大规模自动化生产的再放大提供了可能。 |
| 国际公布 |
