公开(公告)号 | CN1244691C |
公开(公告)日 | 2006.03.08 |
申请(专利)号 | CN200410014095.9 |
申请日期 | 2004.02.18 |
专利名称 | 自体胸水上清培养TIL细胞的方法 |
主分类号 | C12N5/08(2006.01)I |
分类号 | C12N5/08(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 南京大学医学院附属鼓楼医院 |
发明(设计)人 | 刘宝瑞;邹征云 |
地址 | 210008江苏省南京市中山路321号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 南京苏科专利代理有限责任公司 |
代理人 | 孙 鸥 |
国省代码 | 江苏;32 |
主权项 | 自体胸水上清培养TIL细胞的方法,无菌收集癌性胸水,离心后保存上清,用淋巴细胞分离液分离下层细胞,去除下层细胞中的红细胞、坏死组织碎片,其特征在于 (1)将上清留作培养基; (2)取下层细胞中的白膜层细胞至上清培养基培养; (3)12~24小时后,肿瘤细胞全部贴壁,悬浮的是TIL细胞; (4)将浓度在5×105/ml~1×106/ml的TIL细胞置于饱和湿度、5%二氧化碳孵箱内培养,温度控制在37℃内; (5)1天后,加入终浓度50~100ng/ml的OKT3、800~6000U/ml的IL-2、50~100ug/ml的PHA; (6)隔1~2天,加入含800~6000U/ml的IL-2的完全培养基进行培养。 |
摘要 | 本发明涉及一种利用自体胸水上清进行TIL细胞的培养方法。本发明采用将收集的癌性胸水离心后保存上清,用作培养基,将下层细胞中的白膜层细胞至该上清培养基中培养,得悬浮的TIL细胞,再至孵箱内培养,1天后加入OKT3、IL-2、PHA等,1、2天再加入IL-2进行培养。本发明的实验数据表明该方法是可行的,与现有方法相比,某些方面相同,某些方面更优。而本发明却避免了现有方法使用人AB血清可能导致的乙肝、爱滋病等传染,体外培养时间过长所增加的污染机率,以及培养时间过长增加病人负担,延长治疗时间和成本增加等缺陷。 |
国际公布 |