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编码新的融合蛋白的DNA和通过该DNA的表达来制备有用的多肽的方法

公开(公告)号 CN100338091C  
公开(公告)日 2007.09.19  
申请(专利)号 CN99120748.3  
申请日期 1999.09.25  
专利名称 编码新的融合蛋白的DNA和通过该DNA的表达来制备有用的多肽的方法  
主分类号 C07K14/32(2006.01)I  
分类号 C07K14/32(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/31(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 伊藤火腿株式会社;鹈高重三  
发明(设计)人 佐藤静治;东久迩真彦;工藤季之;近藤雅昭  
地址 日本兵库县  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 中原信达知识产权代理有限责任公司  
代理人 丁业平  
国省代码 日本;JP  
主权项 一种分离的DNA,其能够在短芽孢杆菌(Bacillusbrevis)中生产外源多肽,包括与芽孢杆菌启动子区的核酸序列的3’端连接并且编码包含线性连接的第一,第二和第三序列的融合蛋白的核苷酸序列,其中所述第一序列的组成为自芽孢杆菌细胞壁蛋白(CWP)N末端开始的n个基酸残基的序列,其中当外源肽为人前胰岛素时,n为6,7,8,10,11,12,15,17,20或50,当外源肽为人胰高血糖素时,n为20,以及当外源多肽为突变人生长激素时,n为1-12,14,20或30,第二序列的组成为一个或多个氨基酸残基用于通过化学或酶法将所述第三序列与所述第一序列切开,所述第二序列在第三序列中不存在,以及第三序列包含的外源多肽序列选自人前胰岛素,人胰高血糖素,和在N末端带有甘氨酸或丝氨酸的突变人生长激素,由此所述第三序列能够通过化学或酶法仅在所述第二序列处与所述第一序列切开。  
摘要 本发明涉及一种包含编码融合蛋白的核苷酸序列的DNA、包含所述DNA的载体、包含所述载体的属于芽孢杆菌属的细菌和通过培养所述的细菌来制备有用的多肽的方法,其中所述的融合蛋白包括:由芽孢杆菌的细胞壁蛋白的信号肽序列、用于分离及纯化所述融合蛋白的标记序列、接头序列、由用于化学或酶促裂解的序列、和外源多肽序列;所述的这些序列彼此按序线性连接,所述的信号肽序列、标记和接头是任选的序列,并且其中所述的核苷酸序列与包含芽孢杆菌启动子区的核酸序列的3’-末端相连。  
国际公布  
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