| 公开(公告)号 | CN1297663C |
| 公开(公告)日 | 2007.01.31 |
| 申请(专利)号 | CN03130685.3 |
| 申请日期 | 2003.05.07 |
| 专利名称 | 一类重组基因产生的朊蛋白（PrPC)融合变构体及其用途 |
| 主分类号 | C12N15/62(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/62(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;A61P31/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国科学院微生物研究所 |
| 发明(设计)人 | 田 波;尹少满;杨怀义 |
| 地址 | 100000北京市中关村北一条13号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 中科专利商标代理有限责任公司 |
| 代理人 | 姜兆元 |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种含有正常朊蛋白基因与酵母朊病毒Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的重组基因，所述朊蛋白基因选自人、牛或羊朊蛋白基因。2.一种由权利要求1所述的重组基因所表达的融合变构体。3.按照权利要求1所述的重组基因，其中，酵母朊病毒基因片段融合在正常朊蛋白基因的N端或C端，酵母朊病毒基因片段和正常朊蛋白基因直接融合或加适当的连接区。4.权利要求3所述的重组基因，其中所述的连接区为八聚甘氨酸基因片段。5.一种制备权利要求2所述的融合物变构体的方法，包括：1)正常朊蛋白基因与酵母朊病毒Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的融合，所述朊蛋白基因选自人、牛或羊朊蛋白基因；2)将1)的基因融合重组片段插入到原核表达载体pET30a(+)中，在大肠杆菌BL21中表达、表达产物用6M盐酸胍溶解，进行Ni亲合层析和柱上复性，以16％SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝鉴定纯度，得到大于95％纯度的蛋白，所得组分浓度高于1mg/ml；3)将浓度至少为1mg/ml的重组蛋白在pH4.0-9.0的缓冲液中，0℃-37℃反应至少7小时，获得融合物变构体。6.根据权利要求2所述的融合变构体，在制备蛋白酶消化朊蛋白试剂中的应用。7.权利要求2所述的融合变构体，在制备朊病毒的检测与诊断阳性对照试剂中的应用。 |
| 摘要 | 本发明提供了一类由酵母朊病毒结构域与动物和人正常朊蛋白基因重组表达的融合变构体，其中正常朊蛋白基因可来自人、牛、羊、鹿、貂、鸡、猫等。酵母朊病毒结构域基因为Ure2p1-65或Sup351-114。域Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的重组及其表达的融合变构体的制备方法。这种融合变构体可作为阳性对照替代品应用于疯牛病等朊病毒病的检测与诊断，其优越性在于避免了用有病脑组织提取物作为阳性对照造成传染的危险，以及未发生疯牛病等朊病毒病的国家获得阳性对照。 |
| 国际公布 |
