| 公开(公告)号 | CN100335631C |
| 公开(公告)日 | 2007.09.05 |
| 申请(专利)号 | CN97181012.5 |
| 申请日期 | 1997.10.29 |
| 专利名称 | 三股螺旋蛋白的稳定表达 |
| 主分类号 | C12N15/12(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/12(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N15/53(2006.01)I;C07K14/78(2006.01)I;A61K38/39(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 1996.10.29 AU PO3310;1996.12.19 AU PO4306 |
| 申请(专利权)人 | 联邦科学及工业研究组织 |
| 发明(设计)人 | P·R·沃恩;M·加拉尼斯;J·A·M·拉姆肖;J·A·维尔克梅斯特 |
| 地址 | 澳大利亚澳大利亚首都直辖区 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | 1997-10-29 PCT/AU1997/000721 |
| 进入国家日期 | 1999.06.24 |
| 专利代理机构 | 中国专利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 卢新华;齐曾度 |
| 国省代码 | 澳大利亚;AU |
| 主权项 | 一种在酵母中生产羟化三股螺旋蛋白的方法，该方法包括以下步骤：将以下成分导入一种合适的酵母宿主细胞：与在所述酵母宿主细胞中有功能的启动子可操作地连接的编码P4Hα亚基的第一核苷酸序列，与在所述酵母宿主细胞中有功能的启动子可操作地连接的编码P4Hβ亚基的第二核苷酸序列，与在所述酵母宿主细胞中有功能的启动子可操作地连接的编码合成肽的第三核苷酸序列，所述肽具有以下通式，并且在羟化以后生成所述羟化三股螺旋蛋白：(A)l(B)m(GlyXY)n(C)o(D)p，其中，(GlyXY)n表示三股螺旋形成重复序列，其中Gly表示甘氨酸，其中X和Y可相同或不同，各自表示一个氨基酸，且其中在GlyXY三联体与GlyXY三联体之间，由X和Y表示的每一个氨基酸可以不同，不过，其中三股螺旋形成重复序列(GlyXY)n中的至少一个Y必须是脯氨酸，其中A和D各自表示包括三股螺旋形成重复序列(GlyXY)n的肽结构域，其中B和C各自表示不包括三股螺旋形成重复序列(GlyXY)n的非胶原序列，其中，n是2-1500的整数，其中，l，m，o和p各自选自0和1，前提是m和o中至少一个是1；并且在适于表达所述第一、第二和第三核苷酸序列的条件下培养所述酵母宿主细胞，从而产生所述羟化三股螺旋蛋白；其中，在所述培养步骤中所述第一、第二和第三核苷酸序列由所述酵母宿主细胞稳定地保持并分离。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种在酵母中生产羟化三股螺旋蛋白的方法，包括以下步骤：将编码P4Hα亚基的第一核苷酸序列、编码P4Hβ亚基的第二核苷酸序列以及一个或几个产物编码核苷酸序列导入一种合适的酵母宿主细胞，所述产物编码核苷酸序列编码一种或几种多肽或肽，这些多肽或肽在羟化以后生成所述羟化三股螺旋蛋白，所述第一、第二和产物编码核苷酸序列的每一个均可操作地与启动子序列连接；在适于表达所述第一、第二和产物编码核苷酸序列的条件下培养所述酵母宿主细胞，从而产生所述羟化三股螺旋蛋白；其中，该方法的特征在于导入所述第一、第二和产物编码核苷酸序列的步骤会导致所述第一、第二和产物编码核苷酸序列及其相应的可操作地连接的启动子序列被携带在一个或几个可复制的DNA分子上，该分子在所述培养步骤中由所述酵母宿主细胞稳定地保持并分离。还披露了用本发明方法生产的转化酵母宿主细胞和三股螺旋蛋白。 |
| 国际公布 | 1998-05-07 WO1998/018918 英 |
