| 公开(公告)号 | CN100334219C |
| 公开(公告)日 | 2007.08.29 |
| 申请(专利)号 | CN200510018686.8 |
| 申请日期 | 2005.05.12 |
| 专利名称 | 共聚物促进超声介导基因转染的方法 |
| 主分类号 | C12N15/87(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/87(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 |
| 发明(设计)人 | 陈云超;张青萍 |
| 地址 | 430030湖北省武汉市汉口解放大道1095号(同济医院科研处) |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 武汉开元专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 胡镇西 |
| 国省代码 | 湖北;42 |
| 主权项 | 一种共聚物促进超声介导基因转染的方法，包括以下步骤：1)将共聚物溶解在生理盐水中，配制成共聚物溶液，过滤除菌后备用，所选择的共聚物为F127、L61、或P85中的一种；2)将细胞悬液接种在培养皿中隔夜培养，然后将培养皿中的培养液吸干，用磷酸缓冲液清洗，再吸干残液；3)准备转染液：在试管中加入DNA、步骤1)所配制的共聚物溶液、和与步骤2)中细胞悬液对应的细胞培养液，使试管中DNA的最终浓度为8μg/ml，共聚物的最终浓度按mg/ml计量为0.001％～0.1％；4)将步骤3)所准备的转染液加入到步骤2)的培养皿中，转染液的加入量与细胞悬液的接种量相同，置温箱中培养10～30分钟；5)将治疗用超声仪探头面朝上安置在水槽中，水平面覆盖探头，然后将步骤4)所得待照射培养皿的底部浸在水中紧邻探头，并使待照射孔在探头的正上面，在照射过程中匀速移动培养皿使培养孔内的细胞受到均匀照射；6)将经过步骤5)照射的培养皿置温箱中隔夜培养，次日先用荧光显微镜观察基因转染情况，然后用胰蛋白酶悬浮细胞，流式细胞仪检测细胞转染率后，用胎盘蓝染色检测细胞成活率。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种共聚物促进超声介导基因转染的方法，主要解决现有非病毒载体基因转染率较低的问题。该方法是将共聚物和超声结合起来，应用不同的浓度，来检测各类共聚物对不同细胞系在超声介导中的基因转染作用，并通过流式细胞仪、荧光显微镜和细胞计数器进行细胞转染率和成活率的检测，从而获得不同共聚物在不同浓度时对超声介导基因转染的作用。从附图中人们可清晰地看到，在一定浓度范围内，这类共聚物和超声一起可作为一种有效的非病毒基因转染载体提高基因转染，这对疾病的基因治疗研究工作具有重要的指导意义。 |
| 国际公布 |
