| 公开(公告)号 | CN1325639C |
| 公开(公告)日 | 2007.07.11 |
| 申请(专利)号 | CN03134768.1 |
| 申请日期 | 2003.09.29 |
| 专利名称 | 高纯度蚓激酶的制备方法及由其制备的药物制剂 |
| 主分类号 | C12N9/48(2006.01)I |
| 分类号 | C12N9/48(2006.01)I;A61K38/48(2006.01)I;A61P7/02(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 北京赛生药业有限公司 |
| 发明(设计)人 | 马 骉;魏化伟;吴 丹;宋梦薇;张 颖 |
| 地址 | 100078北京市经济技术开发区兴盛街8号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京律诚同业知识产权代理有限公司 |
| 代理人 | 徐金国;梁 挥 |
| 国省代码 | 北京;11 |
| 主权项 | 一种高纯度蚓激酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蚓激酶粗品的提取：取鲜活蚯蚓用水洗净，加入食盐处理；加入pH6.8～8.3的缓冲液，用胶体磨制备匀浆；将匀浆液反复冻融；将匀浆液加热，去除对热不稳定的杂蛋白；将匀浆液离心，取上清液；上清液经超滤浓缩，截留分子量为10000～50000道尔顿的组分，冷冻干燥制得蚓激酶粗品；(2)蚓激酶粗品的纯化：将步骤(1)中获得的蚓激酶粗品溶于缓冲液中，离心，取上清液用离子交换层析柱分离，得到蚓激酶活性组分；(3)蚓激酶活性组分的再纯化：将步骤(2)中的蚓激酶活性组分用缓冲液溶解，用单克隆抗体亲合层析柱进行再纯化，用缓冲液平衡至流出液在蛋白检测仪上绘出稳定的基线后，再用含有洗脱剂的亲和层析洗脱液洗脱，收集活性洗脱峰，冷冻干燥得到高纯度的蚓激酶；其中步骤(2)中离子交换层析采用羧甲基葡聚糖凝胶柱或二乙氨基葡聚糖凝胶柱或琼脂糖凝胶柱层析，先用缓冲液平衡脱洗，再用含有0～0.5mol/LNaCl的缓冲液进行梯度洗脱；所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液；步骤(3)中单克隆抗体亲和层析柱是由蚓激酶抗体偶联到经过溴化氰活化处理的羧甲基葡聚糖凝胶、二乙氨基葡聚糖凝胶或琼脂糖凝胶的多糖基质上制得的。 |
| 摘要 | 本发明公开一种高纯度蚓激酶的制备方法及以其为原料药的制剂。本发明通过采用单克隆抗体技术实现蚓激酶活性组分的再纯化，从而得到高纯度蚓激酶，该方法的特点是所获酶的专一性强，活性高，达到每毫克蛋白20万单位以上；经高效液相色谱测试为单一组分；在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现一条带，分子量为32000±2000道尔顿；氨基酸序列分析，N-末端10个氨基酸序列为：Ile-Val-Gly-Gly-Ile-Glu-Ala-Arg-Pro-Tyr，以所述高纯度蚓激酶为原料药可以制成可供口服、肌注、以及静脉注射与静脉输液多种途径给药的制剂，用于血栓性疾病的治疗。 |
| 国际公布 |
