| 公开(公告)号 | CN1322135C |
| 公开(公告)日 | 2007.06.20 |
| 申请(专利)号 | CN200410060813.6 |
| 申请日期 | 2004.09.09 |
| 专利名称 | 细胞因子IL-24真核表达载体的构建及应用 |
| 主分类号 | C12N15/79(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/79(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 武汉大学 |
| 发明(设计)人 | 章晓联;瞿少刚;周 翔;吴建国;陈 明;李平飞 |
| 地址 | 430072湖北省武汉市武昌珞珈山 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 武汉宇晨专利事务所 |
| 代理人 | 王敏锋 |
| 国省代码 | 湖北;42 |
| 主权项 | 一种细胞因子IL-24真核表达载体的构建方法，它包括下列步骤：A、目的基因的扩增与纯化，根据人IL-24 GeneBank序列设计引物，上游引物：5’GCAGATCTAATTTTCAACAGAGGCTG-3’，含有BglII酶切位点；下游引物：5’CGGTCGACTCAGAGCTTGTAGAATTTCTG-3’，含有Sal I酶切位点，以插入人IL-24完整编码区基因的质粒TRAPIL-24为模板，采用上述引物从人IL-24 N端编码的第2个氨基酸开始进行PCR扩增，扩增的反应条件为：95℃预变性2分钟，以95℃变性36秒，56℃退火36秒，72℃延伸1分钟24秒，扩增25个循环，再以72℃延伸5分钟，PCR扩增产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳，将目的条带切下后，用试剂盒回收纯化；B、重组质粒pEGFP-C1-IL-24构建与鉴定，将纯化的PCR产物和载体pEGFP-C1用BglII和SalI双酶切后，分别用试剂盒回收纯化酶切产物，在T4DNA连接酶作用下定向连接IL-24片段至pEGFP-C1，将连接产物转化入DH5a感受态细菌中，在LB培养基中筛选培养，挑取阳性克隆，培养后提取质粒，采用BglII和SalI双位点单、双酶切鉴定，测序。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种细胞因子IL-24真核表达载体的构建及应用，其步骤是：首先是目的基因的扩增与纯化，设计上引物和下引物，以质粒TRAPIL-24为模板，采用人IL-24N端编码的第2个氨基酸开始进行PCR扩增，将目的条带切下后，用试剂盒回收纯化；其次是重组质粒pEGFP-C1-IL-24构建与鉴定，将纯化的PCR产物和载体pEGFP-C1用Bgl II和Sal I双酶切后，分别用试剂盒回收纯化酶切产物，连接片段，筛选培养，克隆，鉴定，测序。本发明包括证实重组细胞因子IL-24在治疗肝癌、小肠癌、黑色素瘤中的应用。本发明方法简便，操作方便，能抑制、预防和治疗肿瘤的生长。 |
| 国际公布 |
