| 公开(公告)号 | CN1320118C |
| 公开(公告)日 | 2007.06.06 |
| 申请(专利)号 | CN200410073165.8 |
| 申请日期 | 2004.10.11 |
| 专利名称 | 人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌高表达载体和制备方法 |
| 主分类号 | C12N15/70(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/70(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;A61P19/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 发明(设计)人 | 陈苏民;秦 云;陈南春 |
| 地址 | 710049陕西省西安市长乐西路15号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 孙 枫 |
| 国省代码 | 陕西;61 |
| 主权项 | 一种人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体，其特征在于：所述的人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体是指用分子克隆技术将从人体组织cDNA文库中扩增得到人骨形成蛋白-4成熟肽的cDNA序列，再克隆重组获得的大肠杆菌表达载体pDH2-hB4m，该载体能够在大肠杆菌中高水平表达出人骨形成蛋白-4成熟肽，载体DNA全长4，014个核苷酸对，全部核苷酸序列如下：1 AGATCTCTCT CACCTACCAA ACAATGCCCC CCTGCAAAAA ATAAATTCAT ATAAAAAACATCTAGAGAGA GTGGATGGTT TGTTACGGGG GGACGTTTTT TATTTAAGTA TATTTTTTGT61 TACAGATAAC CATCTGCGGT GATAAATTAT CTCTGGCGGT GTTGACATAA ATACCACTGGATGTCTATTG GTAGACGCCA CTATTTAATA GAGACCGCCA CAACTGTATT TATGGTGACC121 CGGTGATACT GAGCACATCA GCAGGACGCA CTGACCACCA TGAAGGTGAC GCTCTTAAAAGCCACTATGA CTCGTGTAGT CGTCCTGCGT GACTGGTGGT ACTTCCACTG CGAGAATTTT181 ATTAAGCCCT GAAGAAGGGC AGCATTCAAA GCAGAAGGCT TTGGGGTGTG TGATACGAAATAATTCGGGA CTTCTTCCCG TCGTAAGTTT CGTCTTCCGA AACCCCACAC ACTATGCTTT241 CGAAGCATTG GTTAAAAATT AAGGAGAATT CATGAAGCAT CACTCACAGC GGGCCAGGAAGCTTCGTAAC CAATTTTTAA TTCCTCTTAA GTACTTCGTA GTGAGTGTCG CCCGGTCCTT301 GAAGAATAAG AACTGCCGGC GCCACTCGCT CTATGTGGAC TTCAGCGATG TGGGCTGGAACTTCTTATTC TTGACGGCCG CGGTGAGCGA GATACACCTG AAGTCGCTAC ACCCGACCTT361 TGACTGGATT GTGGCCCCAC CAGGCTACCA GGCCTTCTAC TGCCATGGGG ACTGCCCCTTACTGACCTAA CACCGGGGTG GTCCGATGGT CCGGAAGATG ACGGTACCCC TGACGGGGAA421 TCCACTGGCT GACCACCTCA ACTCAACCAA CCATGCCATT GTGCAGACCC TGGTCAATTCAGGTGACCGA CTGGTGGAGT TGAGTTGGTT GGTACGGTAA CACGTCTGGG ACCAGTTAAG481 TGTCAATTCC AGTATCCCCA AAGCCTGTTG TGTGCCCACT GAACTGAGTG CCATCTCCATACAGTTAAGG TCATAGGGGT TTCGGACAAC ACACGGGTGA CTTGACTCAC GGTAGAGGTA541 GCTGTACCTG GATGAGTATG ATAAGGTGGT ACTGAAAAAT TATCAGGAGA TGGTAGTAGACGACATGGAC CTACTCATAC TATTCCACCA TGACTTTTTA ATAGTCCTCT ACCATCATCT601 GGGATGTGGG TGCCGCTGAT AATCTAGAGT CGACCTGCAG GCATGCAAGC TTCTGTTTTGCCCTACACCC ACGGCGACTA TTAGATCTCA GCTGGACGTC CGTACGTTCG AAGACAAAAC661 GCGGATGAGA GAAGATTTTC AGCCTGATAC AGCTTAAATC AGAACGCAGA AGCGGTCTGACGCCTACTCT CTTCTAAAAG TCGGACTATG TCGAATTTAG TCTTGCGTCT TCGCCAGACT721 TAAAACAGAA TTTGCCTCCC GGCAGTAGCG CGGTGGTCCC ACCTGACCCC ATGCCGAACTATTTTGTCTT AAACGGAGGG CCGTCATCGC GCCACCAGGG TGGACTGGGG TACGGCTTGA781 CAGAAGTGAA ACGCCGTAGC GCCGATGGTA GTGTGGGGTC TCCCCATGCG AGAGTAGCCAGTCTTCACTT TGCGGCATCG CGGCTACCAT CACACCCCAG AGGGGTACGC TCTCATCGGT841 ACTGCCAGGC ATCAAATAAA ACGAAAGGCT CAGTCGAAAG ACTGGGCCTT TCGTTTTATCTGACGGTCCG TAGTTTATTT TGCTTTCCGA GTCAGCTTTC TGACCCGGAA AGCAAAATAG901 TGTTGTTTGT CGGTGAACGC TCTCCTGAGT AGGACAAATC CGCCGGGAGC GGATTTGAACACAACAAACA GCCACTTGCG AGAGGACTCA TCCTGTTTAG GCGGCCCTCG CCTAAACTTG961 GTTGCGAAGC AACGGCCCGG AGGGTGGCGG GCAGGACGCC CGCCATAAAC TGCCAGGCATCAACGCTTCG TTGCCGGGCC TCCCACCGCC CGTCCTGCGG GCGGTATTTG ACGGTCCGTA1021 CAAATTAAGC AGAAGGCCAT CCTGACGGAT GGCCTTTTTG CGTTTCTACA AACTCTTTGTGTTTAATTCG TCTTCCGGTA GGACTGCCTA CCGGAAAAAC GCAAAGATGT TTGAGAAACA1081 TTATTTTTCT AAATACATTC AAATATGTAT CCGCTCATGA GACAATAACC CTGATAAATGAATAAAAAGA TTTATGTAAG TTTATACATA GGCGAGTACT CTGTTATTGG GACTATTTAC1141 CTTCAATAAT ATTGAAAAAG GAAGAGTATG AGTATTCAAC ATTTCCGTGT CGCCCTTATTGAAGTTATTA TAACTTTTTC CTTCTCATAC TCATAAGTTG TAAAGGCACA GCGGGAATAA1201 CCCTTTTTTG CGGCATTTTG CCTTCCTGTT TTTGCTCACC CAGAAACGCT GGTGAAAGTAGGGAAAAAAC GCCGTAAAAC GGAAGGACAA AAACGAGTGG GTCTTTGCGA CCACTTTCAT1261 AAAGATGCTG AAGATCAGTT GGGTGCACGA GTGGGTTACA TCGAACTGGA TCTCAACAGCTTTCTACGAC TTCTAGTCAA CCCACGTGCT CACCCAATGT AGCTTGACCT AGAGTTGTCG1321 GGTAAGATCC TTGAGAGTTT TCGCCCCGAA GAACGTTTTC CAATGATGAG CACTTTTAAACCATTCTAGG AACTCTCAAA AGCGGGGCTT CTTGCAAAAG GTTACTACTC GTGAAAATTT1381 GTTCTGCTAT GTGGCGCGGT ATTATCCCGT ATTGACGCCG GGCAAGAGCA ACTCGGTCGCCAAGACGATA CACCGCGCCA TAATAGGGCA TAACTGCGGC CCGTTCTCGT TGAGCCAGCG1441 CGCATACACT ATTCTCAGAA TGACTTGGTT GAGTACTCAC CAGTCACAGA AAAGCATCTTGCGTATGTGA TAAGAGTCTT ACTGAACCAA CTCATGAGTG GTCAGTGTCT TTTCGTAGAA1501 ACGGATGGCA TGACAGTAAG AGAATTATGC AGTGCTGCCA TAACCATGAG TGATAACACTTGCCTACCGT ACTGTCATTC TCTTAATACG TCACGACGGT ATTGGTACTC ACTATTGTGA1561 GCGGCCAACT TACTTCTGAC AACGATCGGA GGACCGAAGG AGCTAACCGC TTTTTTGCACCGCCGGTTGA ATGAAGACTG TTGCTAGCCT CCTGGCTTCC TCGATTGGCG AAAAAACGTG1621 AACATGGGGG ATCATGTAAC TCGCCTTGAT CGTTGGGA |
| 摘要 | 本发明涉及人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体及其所表达的人骨形成蛋白-4成熟肽的制备方法。所述的载体是指用分子克隆技术重组获得的大肠杆菌表达载体pDH2-hB4m，载体全长4,014个核苷酸对；所述利用表达载体pDH2-hB4m制备具有生物学活性人骨形成蛋白-4成熟肽的方法，包括宿主菌转化表达、培养、纯化、复性、活性鉴定步骤。本发明所提供的大肠杆菌高表达载体和用该载体转化宿主菌表达人骨形成蛋白-4成熟肽的制备方法，可以作为新的基因工程产品及其方法推向临床治疗、诊断和科学研究应用，并推向市场。 |
| 国际公布 |
