公开(公告)号
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CN1318443C
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公开(公告)日
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2007.05.30
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申请(专利)号
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CN01812855.6
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申请日期
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2001.05.16
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专利名称
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含游离半胱氨酸残基的蛋白重折叠的方法
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主分类号
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C07K1/113(2006.01)I
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分类号
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C07K1/113(2006.01)I;C07K14/535(2006.01)I;C07K14/505(2006.01)I;C07K14/515(2006.01)I;C07K14/56(2006.01)I;C07K14/61(2006.01)I;C07K14/78(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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2000.5.16 US 60/204,617
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申请(专利权)人
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博尔德生物技术公司
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发明(设计)人
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玛丽·S·罗森达尔;乔治·N·考克斯;丹尼尔·H·多尔蒂
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地址
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美国科罗拉多州
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颁证日
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国际申请
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2001-05-16 PCT/US2001/016088
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进入国家日期
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2003.01.15
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专利代理机构
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北京市柳沈律师事务所
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代理人
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巫肖南;封新琴
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国省代码
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美国;US
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主权项
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制备不溶或聚集蛋白的重折叠可溶形式的方法,其中所述蛋白是生长激素超基因家族成员且含一个或多个添加的游离半胱氨酸残基,所述方法包括步骤:a.使宿主细胞表达含一个或多个添加的游离半胱氨酸残基的蛋白,所述蛋白是不溶或聚集形式的生长激素超基因家族成员;b.用化学方法、酶学或物理方法裂解细胞;c.使不溶或聚集的蛋白接触变性试剂、还原剂和半胱氨酸阻断剂而溶解和还原不溶或聚集的蛋白;和d.通过使变性试剂和还原剂的浓度降低到足以允许蛋白复性为可溶的生物活性形式的水平而重折叠蛋白,其中所述半胱氨酸阻断剂与该蛋白中的至少一个游离半胱氨酸残基形成可逆混合二硫化物。
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摘要
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本发明涉及制备具有游离半胱氨酸的重折叠不溶或聚集蛋白的新方法,其中宿主细胞表达的蛋白接触半胱氨酸阻断剂。然后,可修饰该新方法制备的可溶重折叠蛋白以增加它们的效力。这种修饰包括连接PEG部分以形成PEG化蛋白。
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国际公布
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2001-11-22 WO2001/087925 英
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