公开(公告)号
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CN1318586C
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公开(公告)日
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2007.05.30
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申请(专利)号
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CN02822098.6
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申请日期
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2002.10.30
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专利名称
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短的双链RNAs的体外合成方法
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主分类号
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C12N15/11(2006.01)I
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分类号
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C12N15/11(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;A61K31/713(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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2001.11.5 US 60/337,975
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申请(专利权)人
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詹森药业有限公司
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发明(设计)人
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M·D·德贝克;A·N·哈里斯
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地址
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比利时比尔斯
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颁证日
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国际申请
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2002-10-30 PCT/EP2002/012165
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进入国家日期
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2004.05.08
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专利代理机构
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中国专利代理(香港)有限公司
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代理人
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李 波;徐雁漪
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国省代码
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比利时;BE
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主权项
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一种用于合成长度少于30个核苷酸的靶特异性短的双链RNAs的方法,包括以下步骤:a)在一种反应混合物中混合靶特异性有义寡核苷酸模板和T7RNA聚合酶,以便形成模板延伸的有义寡核糖核苷酸产物;b)在一种反应混合物中混合靶特异性反义寡核苷酸模板和T7RNA聚合酶,以便形成模板延伸的反义寡核糖核苷酸产物;和c)让在步骤a)中获得的有义寡核糖核苷酸产物与在步骤b)中获得的互补性反义寡核糖核苷酸产物杂交,其特征在于:步骤a)和b)的寡核苷酸模板包括由图1所示的截短的T7 RNA聚合酶启动子序列组成的RNA聚合酶启动子序列,在所述模板链的5’末端用靶特异性模板序列延伸,其中,所述靶特异性模板序列包括位于5’末端的两个鸟苷,和位于3’末端的两个胞苷。
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摘要
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本发明涉及合成短的双链RNAs的领域。披露了利用噬菌体聚合酶和用靶序列特异性单链DNA寡核苷酸作模板的体外转录方法。本发明特别适用于合成短的干扰RNAs(siRNAs),业已证实这种干扰RNAs是在植物中的转录后基因沉默期间引起序列特异性RNA降解,以及无脊椎动物和脊椎动物系统的RNA干扰中的关键中间体。
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国际公布
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2003-05-15 WO2003/040294 英
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