| 公开(公告)号 | CN1316014C |
| 公开(公告)日 | 2007.05.16 |
| 申请(专利)号 | CN200410017587.3 |
| 申请日期 | 2004.04.09 |
| 专利名称 | 骨髓间充质干细胞的规模化制备方法 |
| 主分类号 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分类号 | C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 华东理工大学 |
| 发明(设计)人 | 周 燕;谭文松;胡静波;蒋丹丹 |
| 地址 | 200237上海市梅陇路130号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 中原信达知识产权代理有限责任公司 |
| 代理人 | 罗大忱 |
| 国省代码 | 上海;31 |
| 主权项 | 一种骨髓间充质干细胞的规模化制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)MSCs分离培养将从骨髓细胞悬液中分离的单个核细胞，以1～5×105cells/cm2的密度接种接种在添加了10％胎牛血清的α-MEM中进行原代培养，24小时后更换培养液，除去未贴壁细胞，此后每1～3天换液一次，原代细胞长至汇合后以0.25％胰酶+0.02％EDTA消化细胞；(2)MSCs的微载体系统悬浮培养细胞以0.5～2.5×105cells/ml密度接种于预先硅化过的搅拌悬浮培养装置中，与CT-3微载体共同培养，微载体用量为2～10mg/ml，采用10～30rpm转速进行接种，24小时后提高转速至40～60rpm进行培养，培养基为添加了10％胎牛血清的α-MEM，每天至每2天，半量换液至全换液，3～4天后每天半量换液至全换液；培养条件为37℃、5％CO2、饱和湿度，生物反应器系统设定操作条件为：pH7.0～7.2，温度37℃，溶氧为30％～50％空气饱和度；(3)收获细胞细胞长满微载体后，以胰酶或胶原酶消化微载体表面包被的胶原，使细胞从微载体表面脱落下来，通过静止沉降法分离微载体和细胞。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种骨髓间充质干细胞的规模化制备方法。具体包括如下步骤：1.MSCs分离培养，2.MSCs的微载体系统悬浮培养，3.收获细胞。采用本发明的方法，可以消除常规静态培养系统中的面积限制以及营养物、代谢副产物的浓度梯度，避免了频繁的传代操作，有利于细胞生长和保持干细胞特性，采用生物反应器培养，可收获1×109细胞，真正实现规模化制备骨髓间充质干细胞，为工程化组织构建、细胞治疗、基因治疗或其它科学研究提供大量的种子细胞。 |
| 国际公布 |
