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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:重组表达的羧肽酶B及其纯化专利检索:专利号/专利人/发明人
    

重组表达的羧肽酶B及其纯化

公开(公告)号 CN1311074C  
公开(公告)日 2007.04.18  
申请(专利)号 CN200410098027.5  
申请日期 2004.12.03  
专利名称 重组表达的羧肽酶B及其纯化  
主分类号 C12N9/00(2006.01)I  
分类号 C12N9/00(2006.01)I;C12N9/48(2006.01)I;C12N15/52(2006.01)I;C12N15/57(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N11/00(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权 2003.12.5 EP 03028101.8  
申请(专利权)人 霍夫曼—拉罗奇有限公司  
发明(设计)人 S·格拉瑟;F·盖佩尔;T·柯施鲍姆;B·雷克塞尔;J·-P·塔尔霍菲;R·米勒;C·吉塞尔;H·埃克施泰因;E·沃尔夫  
地址 瑞士巴塞尔  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 中国专利代理(香港)有限公司  
代理人 张轶东;刘 玥  
国省代码 瑞士;CH  
主权项 一种生产具有羧肽酶B活性的蛋白的方法,包括如下步骤:a)提供一种含有编码由N-末端与组酸标记融合的大前羧肽酶B和信号肽构成的前体蛋白的核苷酸序列的载体,由此在组氨酸标记和信号肽之间或在组氨酸标记和大鼠羧肽酶B之间任选地插入一种间隔序列;(b)采用该载体转化一种微生物宿主有机体;(c)在含有营养物和碳源的生长培养基中培养该微生物宿主有机体,其中微生物宿主有机体表达前体蛋白并将组氨酸标记的前羧肽酶B分泌至生长培养基中;(d)把步骤(c)的生长培养基中的分泌的组氨酸标记的前羧肽酶B固定在能结合组氨酸标记的颗粒状的金属螯合物亲和基质上,并冲洗颗粒状的金属螯合物亲和基质,从而将组氨酸标记的前羧肽酶B固定;(e)在一种含有胰蛋白酶的缓冲液中温育步骤(d)中的带有固定化的组氨酸标记的前羧肽酶B的颗粒状的金属螯合物亲和基质,由此通过蛋白水解方式酶切前羧肽酶B部分并将具有羧肽酶B活性的蛋白释放到液相中,由此组氨酸标记的前肽部分被固定;(f)从颗粒状的金属螯合物基质中分离含有具有羧肽酶B活性的蛋白的液相,由此组氨酸标记的前肽部分被固定;和(g)从步骤(f)的液相中纯化具有羧肽酶B活性的蛋白。  
摘要 本发明提供了一种生产来源于非动物宿主有机体的,具有来自前羧肽酶B酶原的羧肽酶B活性的蛋白的制备方法。在非变性条件下,由酶原活化得到羧肽酶B。尤其是,该活化是在避免前肽与活化的羧肽酶B酶的不必要的非共价结合的条件下进行的。  
国际公布  
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