| 公开(公告)号 | CN1311074C |
| 公开(公告)日 | 2007.04.18 |
| 申请(专利)号 | CN200410098027.5 |
| 申请日期 | 2004.12.03 |
| 专利名称 | 重组表达的羧肽酶B及其纯化 |
| 主分类号 | C12N9/00(2006.01)I |
| 分类号 | C12N9/00(2006.01)I;C12N9/48(2006.01)I;C12N15/52(2006.01)I;C12N15/57(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N11/00(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 2003.12.5 EP 03028101.8 |
| 申请(专利权)人 | 霍夫曼—拉罗奇有限公司 |
| 发明(设计)人 | S·格拉瑟;F·盖佩尔;T·柯施鲍姆;B·雷克塞尔;J·-P·塔尔霍菲;R·米勒;C·吉塞尔;H·埃克施泰因;E·沃尔夫 |
| 地址 | 瑞士巴塞尔 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 中国专利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 张轶东;刘 玥 |
| 国省代码 | 瑞士;CH |
| 主权项 | 一种生产具有羧肽酶B活性的蛋白的方法，包括如下步骤：a)提供一种含有编码由N-末端与组氨酸标记融合的大鼠前羧肽酶B和信号肽构成的前体蛋白的核苷酸序列的载体，由此在组氨酸标记和信号肽之间或在组氨酸标记和大鼠羧肽酶B之间任选地插入一种间隔序列；(b)采用该载体转化一种微生物宿主有机体；(c)在含有营养物和碳源的生长培养基中培养该微生物宿主有机体，其中微生物宿主有机体表达前体蛋白并将组氨酸标记的前羧肽酶B分泌至生长培养基中；(d)把步骤(c)的生长培养基中的分泌的组氨酸标记的前羧肽酶B固定在能结合组氨酸标记的颗粒状的金属螯合物亲和基质上，并冲洗颗粒状的金属螯合物亲和基质，从而将组氨酸标记的前羧肽酶B固定；(e)在一种含有胰蛋白酶的缓冲液中温育步骤(d)中的带有固定化的组氨酸标记的前羧肽酶B的颗粒状的金属螯合物亲和基质，由此通过蛋白水解方式酶切前羧肽酶B部分并将具有羧肽酶B活性的蛋白释放到液相中，由此组氨酸标记的前肽部分被固定；(f)从颗粒状的金属螯合物基质中分离含有具有羧肽酶B活性的蛋白的液相，由此组氨酸标记的前肽部分被固定；和(g)从步骤(f)的液相中纯化具有羧肽酶B活性的蛋白。 |
| 摘要 | 本发明提供了一种生产来源于非动物宿主有机体的，具有来自前羧肽酶B酶原的羧肽酶B活性的蛋白的制备方法。在非变性条件下，由酶原活化得到羧肽酶B。尤其是，该活化是在避免前肽与活化的羧肽酶B酶的不必要的非共价结合的条件下进行的。 |
| 国际公布 |
