公开(公告)号
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CN1305902C
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公开(公告)日
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2007.03.21
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申请(专利)号
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CN200410052377.8
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申请日期
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2004.11.25
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专利名称
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一种人白细胞介素29的生产方法及重组IL-29工程菌
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主分类号
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C07K14/54(2006.01)I
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分类号
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C07K14/54(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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汕头大学医学院
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发明(设计)人
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何韶衡;李明才
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地址
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515031广东省汕头市新陵路22号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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广州粤高专利代理有限公司
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代理人
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陈 卫
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国省代码
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广东;44
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主权项
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一种人白细胞介素29的生产方法,其特征在于包括如下步骤:(1)合成PCR引物,并在合成的引物中导入LIC粘性末端,上游引物:5-GACGACGACAAGATCCCCACTTCCAAGCCCAC-3下游引物:3-GAGGAGAAGCCCGGTTTAGGTGGACTCAGGGTGGGTTG-5;(2)PCR扩增:以pcDNA3.1/V5-His-TOPO-IL-29质粒为模板,通过PCR基因扩增,获得IL-29基因片段;(3)将上述PCR扩增得到的IL-29基因片段与pET-44Ek/LIC载体连接,构建重组载体pET-44Ek/LIC-IL-29;(4)将重组载体pET-44Ek/LIC-IL-29转化细菌,构建重组IL-29工程菌;(5)培养构建的重组IL-29工程菌,诱导其表达生产IL-29。
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摘要
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本发明公开了一种人白细胞介素29的生产方法及重组IL-29工程菌。本发明包括人工合成引物;PCR扩增IL-29成熟肽编码区;IL-29原核表达载体pET44-IL-29的构建;转化入大肠杆菌构建重组IL-29工程菌;培养工程菌高效表达IL-29;IL-29的纯化。本发明由于采用不依赖连接反应的克隆方法(LIC),准确、快速获得IL-29基因的成熟肽编码区;使用大肠杆菌偏爱的终止密码子提高表达效率,表达量高,用S蛋白亲和层析柱一步纯化即可获得很纯的产品。IL-29的制备,对临床用于治疗和预防感染性疾病及非感染性疾病具有重要的前景。
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国际公布
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