| 公开(公告)号 | CN1303207C |
| 公开(公告)日 | 2007.03.07 |
| 申请(专利)号 | CN200410013849.9 |
| 申请日期 | 2004.01.08 |
| 专利名称 | 组织型纤溶酶原激活剂突变体的复性分离纯化方法 |
| 主分类号 | C12N9/00(2006.01)I |
| 分类号 | C12N9/00(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国药科大学 |
| 发明(设计)人 | 沈子龙;廖建民;孙石静;张新元 |
| 地址 | 210009江苏省南京市童家巷24号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 南京知识律师事务所 |
| 代理人 | 胡锡瑜 |
| 国省代码 | 江苏;32 |
| 主权项 | 一种组织型纤溶酶原激活剂重组突变体瑞替普酶的复性方法，其特征是：首先收集表达瑞替普酶的基因工程菌菌体，收集包涵体，用组分为6～8M尿素、10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1～100mM咪唑、0～5mM 2-巯基乙醇、pH8的溶液I溶解、离心、取上清，获得变性的瑞替普酶；然后变性的瑞替普酶通过用组分为6～8M尿素、10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1～100mM咪唑、0～5mM 2-巯基乙醇、pH8的溶液I预处理的Ni-Hi2+ Trap柱，上样后，先用两倍柱体积的组分为6～8M尿素、10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1～100mM咪唑、0～5mM 2-巯基乙醇、pH8的溶液I和组分为6～8M尿素、10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、20～500mM咪唑、0～100mM 2-巯基乙醇、pH7～10的溶液II各洗涤一次，再以六倍柱体积的组分为10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、1～100mM咪唑、0～100mM 2-巯基乙醇、pH7～10的溶液III洗涤；最后用两到四倍柱体积的组分为10～100mM Tris-HCl、0.5M NaCl、50mM～1M咪唑、0～5mM 2-巯基乙醇、pH7～10的溶液IV洗脱有活性的瑞替普酶；或在洗涤完成后加入Xa因子，切割(His)6并用NaCl洗脱有活性的瑞替普酶。 |
| 摘要 | 本发明属于医药生物技术重组蛋白分离纯化技术领域，公开了一种用低廉、普通级别的常用试剂咪唑和尿素，以它们的浓度梯度在合适的条件下，使在大肠杆菌中与(His)6融合表达的组织型纤溶酶原激活剂瑞替普酶正确折叠成有活性、并可在使瑞替普酶复性的同时分离纯化得到纯度达到96％的瑞替普酶的方法。该方法不但能简化复性、分离纯化的程序，还能提高复性率，最终提高瑞替普酶的产率，大大降低生产成本，并能应用于工业化生产。 |
| 国际公布 |
