公开(公告)号
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CN1301264C
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公开(公告)日
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2007.02.21
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申请(专利)号
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CN200510000032.2
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申请日期
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2005.01.05
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专利名称
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海洋生物抗氧化活性肽及其制备方法
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主分类号
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C07K7/06(2006.01)I
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分类号
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C07K7/06(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国水产科学研究院黄海水产研究所
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发明(设计)人
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王跃军;孙 谧;邹 建;王海英
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地址
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266071山东省青岛市南京路106号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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北京金信立方知识产权代理有限公司
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代理人
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史和初
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国省代码
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山东;37
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主权项
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一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法,包括(1)抗氧化活性蛋白的制备:①将贝类内脏团绞碎,然后按湿重1∶1(w/w)加入含0.2%Triton-100;0.1mmol/L EDTA的1.0%的NaCl溶液置组织匀浆器中制成匀浆;②调pH为5.6,70℃水浴加热5min,迅速冷却,冷却液经离心10min,收集上清液,调pH至6.7后收取60~90%饱和度的(NH4)2SO4沉淀,沉淀用5mmol/L pH 7.5的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液溶解、透析;③将离心透析液取上清液,加入1.5倍预冷丙酮,将丙酮沉淀物再溶解于5mmol/L pH 7.5的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液中并充分透析得粗蛋白液;④粗蛋白液经聚乙二醇20000浓缩、离心除不溶物,取上清液上DEAE-Sephadex A-50 20×400mm柱,先用5mmol/L pH 7.5的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液充分平衡,再用含0~0.2M氯化钠的上述缓冲液梯度洗脱,流速20ml/h,收集在280nm有吸收的馏份,合并具SOD活性的馏份,浓缩并用双蒸水充分透析、冻干保存;(2)抗氧化活性多肽制备①向抗氧化蛋白加入海洋低温碱性蛋白酶,蛋白质与酶重量比为33∶1.6,调pH为9.0,于30℃恒温水浴中酶解24小时,酶解结束后,将酶解液置于沸水浴中加热使酶失活,冷却,离心除去变性的大分子蛋白,取上清液冷冻干燥;②酶解后粗品用去离子水溶解,经Sephadex G-25凝胶柱层析进一步去除大分子蛋白:用pH7.2三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液平衡后装18×1000mm柱,上样后用平衡缓冲液洗脱,流速为3ml/min,280nm处检测;(3)提纯①CM Sepharose阳离子交换柱层析:阳离子交换剂CM Sepharose Fast Flow,经预处理后用pH3.0的2mM磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液平衡后装30×160mm柱,上样后用缓冲液洗脱到出现基线,再用含0~0.5M氯化钠的上述缓冲液梯度洗脱,收集活性峰;②反相高效液相色谱(RP-HPLC)Waters 2690高效液相色谱系统,Symmetry C18分析型色谱5um,3.9×150mm柱,上样溶液为过膜去离子水,洗脱液为30%乙腈-水溶液,0%~100%洗脱液洗脱15ml,样品收集后真空冷冻干燥,得纯海洋生物抗氧化活性肽。
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摘要
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本发明涉及新型海洋生物抗氧化活性肽及其制备方法,该海洋生物抗氧化活性肽,其特征为一小分子量多肽类物质,分子量为794Da1;由7种氨基酸组成,分别为天冬氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸和赖氨酸,其物质的量之比为1∶1∶1∶1∶2∶1∶1。含有8个氨基酸残基。其中酸性氨基酸的相对含量为9.22%,碱性氨基酸的相对含量为12.62%,极性氨基酸的相对含量为44.8%。本发明提供的海洋生物抗氧化活性肽具有如下明显的优点:抗氧化活性强、水溶性好及安全、无毒、无副作用等,适宜应用于食品、化妆品、医药等领域。
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国际公布
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