| 公开(公告)号 | CN1291029C |
| 公开(公告)日 | 2006.12.20 |
| 申请(专利)号 | CN200410084809.3 |
| 申请日期 | 2004.10.01 |
| 专利名称 | 一种用菜豆间座壳菌真菌代谢的化合物及其制备方法 |
| 主分类号 | C12P17/18(2006.01)I |
| 分类号 | C12P17/18(2006.01)I;C07D493/08(2006.01)I;A61K31/366(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 厦门大学 |
| 发明(设计)人 | 林 昕;黄耀坚;徐庆研;郑忠辉;宋思扬;苏文金 |
| 地址 | 361005福建省厦门市思明南路422号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 厦门南强之路专利事务所 |
| 代理人 | 马应森 |
| 国省代码 | 福建;35 |
| 主权项 | 一种用真菌代谢产生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧杂-双环[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氢-2H-吡喃-3-基酯的制备方法，所说的真菌为菜豆间座壳菌(Diaporhe phaseolorum)HLY2，登记入册的保藏编号为CCTCC NO：M 204061，所说的真菌代谢产生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧杂-双环[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氢-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)的结构式为：其特征在于其步骤为：1)液体培养及发酵液处理：取斜面上菌种接种于半海水配方马铃薯液体培养基中培养至发酵，发酵液经过滤，除去菌体，收集发酵液，分装后加入体积为发酵液0.8～1.2倍的乙酸乙酯进行萃取，萃取时间为5～15h，收集萃取所得的有机相，在45～55℃减压浓缩至膏状；2)化合物的分离：取质量为上样量6～10倍的60～100目硅胶，用干法装柱至硅胶的沉降不再变动，采用真空液相色谱法进行洗脱，洗脱溶剂系统按极性从小到大的顺序，由环己烷开始，环己烷与乙酸乙酯不同体积比混合溶剂，乙酸乙酯，乙酸乙酯与甲醇不同体积混合溶剂，最后至甲醇为洗脱溶剂，总共20级洗脱梯度进行洗脱，收集每个梯度的洗脱液，45～55℃减压浓缩至干，共收集20个回收组分，少量氯仿溶解后至于小管中自然挥干溶剂，若不溶，加入适量甲醇至完全溶解；所用的洗脱溶剂系统洗脱梯度为：环己烷、环己烷∶乙酸乙酯＝49∶1、环己烷∶乙酸乙酯＝48∶2、环己烷∶乙酸乙酯＝46∶4、环己烷∶乙酸乙酯＝42∶8、环己烷∶乙酸乙酯＝38∶12、环己烷∶乙酸乙酯＝34∶16、环己烷∶乙酸乙酯＝25∶25、环己烷∶乙酸乙酯＝16∶34、环己烷∶乙酸乙酯＝10∶40、乙酸乙酯、乙酸乙酯∶甲醇＝46∶4、乙酸乙酯∶甲醇＝42∶8、乙酸乙酯∶甲醇＝34∶16、乙酸乙酯∶甲醇＝25∶25、乙酸乙酯∶甲醇＝16∶34、乙酸乙酯∶甲醇＝1∶3、乙酸乙酯∶甲醇＝1∶4、乙酸乙酯∶甲醇＝1∶9、甲醇；3)选取步骤2)中收集的第8管回收组分，进行进一步硅胶柱分离，取质量为上样量6～10倍的60～100目硅胶，用干法装柱至硅胶的沉降不再变动，采用真空液相色谱法进行洗脱，洗脱溶剂系统按极性从小到大的顺序，由环己烷∶三氯甲烷＝4∶1开始，直至三氯甲烷∶甲醇＝1∶8，总共18个洗脱梯度进行洗脱，收集每个梯度的洗脱液，45～55℃减压浓缩至干，共收集18个回收组分，少量氯仿溶解后至于小管中自然挥干溶剂，若不溶，加入适量甲醇至完全溶解；所说的洗脱溶剂梯度为：环己烷∶三氯甲烷＝4∶1、环己烷∶三氯甲烷＝3∶1、环己烷∶三氯甲烷＝2∶1、环己烷∶三氯甲烷＝1∶1、环己烷∶三氯甲烷＝1∶3、环己烷∶三氯甲烷＝1∶5、环己烷∶三氯甲烷＝1∶6、环己烷∶三氯甲烷＝1∶9、三氯甲烷、三氯甲烷∶甲醇＝30∶1、三氯甲烷∶甲醇＝20∶1、三氯甲烷∶甲醇＝15∶1、三氯甲烷∶甲醇＝10∶1、三氯甲烷∶甲醇＝8∶1、三氯甲烷∶甲醇＝5∶1、三氯甲烷∶甲醇＝1∶1、三氯甲烷∶甲醇＝1∶4、三氯甲烷∶甲醇＝1∶8；4)将步骤3)中回收组分的第7管的管壁上出现的透明针状晶体，用甲醇溶解完全后常温自然挥发溶剂进行重结晶，得到透明针状晶体，制得的真菌代谢产物为乙酸2-(8-甲基-9-氧杂-双环[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氢-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)。 |
| 摘要 | 化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧杂-双环[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氢-2H-吡喃-3-基酯及其制备方法，涉及一种真菌代谢产生的化合物，尤其是一种利用新分离获得的菜豆间座壳菌HLY2代谢产生的化合物Mycoepoxydiene，并将其作为抗肿瘤药物或其他生物活性的先导物。其步骤为：液体培养及发酵液处理，压浓缩至膏状；取硅胶用干法装柱至硅胶的沉降不再变动，洗脱；选取回收组分，进一步硅胶柱分离，取硅胶用干法装柱至硅胶的沉降不再变动，洗脱；将晶体用甲醇溶解后挥发溶剂重结晶，得到透明针状晶体。可用于抗肿瘤药物或其他生物活性的先导物。 |
| 国际公布 |
