| 公开(公告)号 | CN1284797C |
| 公开(公告)日 | 2006.11.15 |
| 申请(专利)号 | CN200510012414.7 |
| 申请日期 | 2005.03.22 |
| 专利名称 | 人重组组织因子的构建表达、纯化方法及其应用 |
| 主分类号 | C07K14/435(2006.01)I |
| 分类号 | C07K14/435(2006.01)I;C07K14/475(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I;C12Q1/56(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 太原博奥特生物技术有限公司 |
| 发明(设计)人 | 焦进安;赵 邑;郝建平;李晋川;谢 红;赵峰梅 |
| 地址 | 030006山西省太原市师范街110号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 山西五维专利事务所有限公司 |
| 代理人 | 李 毅 |
| 国省代码 | 山西;14 |
| 主权项 | 一种人重组组织因子，其核苷酸序列如图1所示，含有天然人组织因子跨膜部分和膜外部分的243个氨基酸残基，为缺失胞内区的截断型人重组组织因子recombinant human tissue factor，简称rhTF243，具有天然人组织因子的全部凝血活性。 |
| 摘要 | 本发明涉及人重组组织因子的构建、表达和纯化方法及应用。从人胎盘中获取得到的TF基因片段与phoA质粒重组，构建质粒载体pTF243，转化到大肠杆菌MM294中，筛选得到工程菌株，接入培养基直接发酵表达，得到的菌液先使用Q-Sepharose Fast Flow基质离子交换层析，再通过TF单抗免疫亲和层析柱吸附洗脱，得到rhTF243蛋白。本发明中TF随培养基中磷的消耗而直接表达，不需增加诱导物和对蛋白质进行变性与复性，简化了发酵工艺，提高了表达率，采用TF单抗纯化rhTF243蛋白，不会受到不可逆损伤，获得rhTF243纯度95％以上，收率大于60％，制备的PT试剂稳定性和敏感性均得到了提高。 |
| 国际公布 |
