公开(公告)号
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CN1282741C
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公开(公告)日
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2006.11.01
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申请(专利)号
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CN96113219.1
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申请日期
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1996.08.25
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专利名称
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核酸扩增方法
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主分类号
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C12N9/00(2006.01)I
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分类号
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C12N9/00(2006.01)I;C12R1/01(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/25(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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1995.8.25 US 002673
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申请(专利权)人
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霍夫曼-拉罗奇有限公司
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发明(设计)人
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戴维·E·伯奇;沃尔特·J·莱尔德;迈克尔·A·佐科利
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地址
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瑞士巴塞尔
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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北京市柳沈律师事务所
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代理人
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巫肖南
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国省代码
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瑞士;CH
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主权项
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一种可逆失活的通过化学修饰的热稳定性酶,它由具有DNA聚合酶活性或连接酶活性的热稳定性酶与能使所述酶活性可逆失活的修饰试剂所形成的混合物反应而产生,其中所述反应是在碱性pH中在低于约25℃的温度中进行,所述试剂是具有下列通式的二羧酸酐其中R1和R2是氢或有机基,它们可以相连,或者所述试剂是具有下列通式的二羧酸酐其中R1和R2是有机基,它们可以相连,且氢是顺式,所述反应导致酶活性基本上完全失活。
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摘要
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本发明提供了由化学修饰而可逆失活的热稳定性酶,其特征在于,该化学修饰的热稳定性酶在温度低于约25℃时呈碱性pH的缓中水液中温育,导致酶活性在少于约20分钟内酶活性无明显增加,且其中所说的化学修饰的酶在配成25℃下约pH 8-9的缓冲水液中在大于约50℃的温度下温育,导致酶活性在少于约20分钟内酶活性至少增加两倍。该化学修饰的热稳定性酶可以用于扩增核酸,该失活酶的活性通过在扩增反应前或作为扩增反应的部分在增高的温度下温育反应混合物而恢复。
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国际公布
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