| 公开(公告)号 | CN1269966C |
| 公开(公告)日 | 2006.08.16 |
| 申请(专利)号 | CN02807389.4 |
| 申请日期 | 2002.03.06 |
| 专利名称 | 用基于转录的扩增来扩增和检测HBV DNA的方法 |
| 主分类号 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分类号 | C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/70(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | 2001.3.7 EP 01200855.3 |
| 申请(专利权)人 | 拜奥默里克斯有限公司 |
| 发明(设计)人 | B·A·L·M·戴曼;I·M·弗兰岑;A·M·W·斯特里杰普 |
| 地址 | 荷兰伯克斯特尔 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | 2002-03-06 PCT/EP2002/002600 |
| 进入国家日期 | 2003.09.26 |
| 专利代理机构 | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 |
| 代理人 | 唐伟杰 |
| 国省代码 | 荷兰;NL |
| 主权项 | 基于转录的扩增目标HBV核酸序列的方法，该方法从存在于样品中的HBVDNA开始，其包括下列步骤：-在扩增缓冲液中将疑似含有HBV的样品与下述成分一起温育：一或多种能够在所选限制位点切割该HBVDNA的限制性内切酶，该限制性内切酶在该HBVDNA链上形成指定的3′末端；启动子引物或正向引物，其中具有包含DNA依赖性的RNA聚合酶所识别的启动子序列的5′区域以及与该DNA链的指定3′末端互补的3′区域；第二或反向引物，其具有与启动子引物相反的极性且含有该目标序列的5′末端；以及在HBVssDNA作为目标序列的情况下，还含有限制性引物；-将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行限制性内切酶的消化；-将如此获得的样品以足以失活限制性内切酶和/或至少部分地导致双链发生单链化的温度和时间进行加热处理；-向样品中加入下列试剂，具有RNA依赖性的DNA聚合酶活性的酶具有DNA依赖性的DNA聚合酶活性的酶具有RNA酶H活性的酶具有RNA聚合酶活性的酶；和-将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行扩增。 |
| 摘要 | 本发明提供基于转录的扩增目标HBV核酸序列的方法，该方法从可选存在于样品中的HBV DNA开始，其包括下列步骤：-在扩增缓冲液中温育怀疑含有HBV的样品，该温育体系中含有一种或多种能够在选择出的限制位点切割HBV DNA的限制性内切酶，该限制性内切酶形成指定的此HBV DNA链的3′末端；该温育体系中含有启动子引物，该启动子引物具有包含被依赖DNA的RNA聚合酶所识别的启动子序列的5′区域和与指定的DNA链的3′末端互补的3′区域；该温育体系中含有第二或反向引物，其具有与启动子引物相反的极性且含有该目标序列的5′末端；且在HBV ssDNA作为目标序列的情况下，该温育体系中含有限制性引物；-将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行限制性内切酶的消化；-将如此获得的样品以一定的温度和时间进行加热处理，该温度和时间足以失活限制性内切酶和/或至少部分地导致双链的单链化；-向样品中加入下列试剂，具有依赖RNA的DNA聚合酶活性的酶、具有依赖DNA的DNA聚合酶活性的酶、具有RNA酶H活性的酶、具有RNA聚合酶活性的酶；和-将如此形成的反应混合物在适当的条件下保持足够的时间，以进行扩增。 |
| 国际公布 | 2002-09-19 WO2002/072881 英 |
