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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:一种制备人载脂蛋白基因重组蛋白的方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

一种制备人载脂蛋白基因重组蛋白的方法

公开(公告)号 CN1268761C  
公开(公告)日 2006.08.09  
申请(专利)号 CN02136716.7  
申请日期 2002.08.29  
专利名称 一种制备人载脂蛋白基因重组蛋白的方法  
主分类号 C12P21/02(2006.01)I  
分类号 C12P21/02(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 上海凯曼生物科技有限公司  
发明(设计)人 周鸣南;龚邦强  
地址 200233上海市田林路219号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 上海开祺知识产权代理有限公司  
代理人 费开逵  
国省代码 上海;31  
主权项 一种人载脂蛋白ApoAIMilano的制备方法,其特征在于1-采用RT-PCR技术从人肝细胞中获得人载脂蛋白基因片段;1-2、通过PCR直接位点突变的方法制得人载脂蛋白基因;1-3、采用PCR方法制备上述的两段基因片段β-B,A-II亚克隆到pMD-T载体上,进行DNA序列测定,然后从pMD-T载体上切下,克隆到含有Tac启动子,LacI抑制蛋白基因、t0转录终止子和Ampr青霉素抗性筛选基因、coLEI复制序列的表达载体pMZG上,再用SphI,HindIII限制性内切酶消化后,按β-B(500bp)A-II(250bp)SphI_SalISalI_HindIIIpMZG(3400bp)SphI_HindIII进行拼装连接,构建重组表达质粒pMZG-3,将此构建的表达人载脂蛋白重组质粒转化进入宿主菌大肠杆菌内,组建成工程菌;1-4、表达工程菌发酵、发酵液处理、纯化,得人载脂蛋白;1-5、纯化的人载脂蛋白用谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽处理,形成人载脂蛋白的二聚体肽。  
摘要 本发明公开了一种人载脂蛋白ApoAIMilano二聚体肽的制备方法,它采用基因重组技术将人的ApoAIMilano基因克隆到表达载体上,构建成表达重组质粒,并转化进入大肠杆菌,组建成表达工程菌,经发酵、纯化工艺获得人ApoAIMilano蛋白,它可用于治疗急性动脉粥样硬化斑块形成而导致的心绞痛心肌梗死等冠状动脉综合症。  
国际公布  
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