| 公开(公告)号 | CN1257180C |
| 公开(公告)日 | 2006.05.24 |
| 申请(专利)号 | CN02139818.6 |
| 申请日期 | 2002.12.11 |
| 专利名称 | 采用氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒快速抽提纯化DNA的方法 |
| 主分类号 | C07H21/04(2006.01)I |
| 分类号 | C07H21/04(2006.01)I;C07H1/08(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 湖南大学 |
| 发明(设计)人 | 王柯敏;何晓晓;李 杜;谭蔚泓;黄杉生;林 霞 |
| 地址 | 410082湖南省长沙市河西岳麓山湖南大学化学化工学院 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 湖南兆弘专利事务所 |
| 代理人 | 赵 洪 |
| 国省代码 | 湖南;43 |
| 主权项 | 一种采用氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒快速抽提纯化DNA的方法，其特征在于：以带正电荷且具磁性的氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒为载体，直接与组织裂解液或细胞裂解液相互作用，带正电荷的氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒与组织裂解液或细胞裂解液中带负电荷的DNA通过静电作用形成纳米颗粒-DNA复合物，在外磁场的作用下实现纳米颗粒-DNA复合物与组织裂解液或细胞裂解液的分离，再通过解离液将结合在纳米颗粒表面的DNA解离下来，从而实现对DNA的抽提纯化；所述的氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒用以下方法制得：第一步首先制备纳米四氧化三铁胶体，即将现配的20mL1mol/L三氯化铁水溶液与5mL2mol/L的二氯化铁溶液混合，其中2mol/L的二氯化铁溶液用2mol/L盐酸配制，加入250mL0.7mol/L的氨水，室温下搅拌半小时后，用磁铁分离，倒掉上清液，所得沉淀用30mLlmol/L四甲基氢氧化铵溶解，然后加入二次蒸馏水至250mL，用孔径为40-80μm的砂芯漏斗过滤，除去聚集的大颗粒；第二步：将体积比为4.2∶1∶1的环己烷、表面活性剂曲拉通X-100和正己醇混合均匀，加入360μL水作为分散相，搅拌5min后形成油包水的微胶囊，加入200μL纳米四氧化三铁胶体，搅拌均匀；再将体积比为1∶1的100μL正硅酸乙酯和100μLN-(β-氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷混合均匀后加入到微胶囊体系中，搅拌均匀后，加入100μL的氨水催化它们在微胶囊中的同步水解，整个反应时间为24小时，反应完备后用丙酮破乳，在外磁场下收集颗粒，即可制备氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒。 |
| 摘要 | 采用氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒快速抽提纯化DNA的方法，以带正电荷且具磁性的氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒为载体，直接与组织裂解液或细胞裂解液相互作用，带正电荷的氨基化二氧化硅壳磁性纳米颗粒与组织裂解液或细胞裂解液中带负电荷的DNA通过静电作用形成纳米颗粒-DNA复合物，在外磁场作用下实现纳米颗粒-DNA复合物与组织裂解液或细胞裂解液的分离，再通过解离液将结合在纳米颗粒表面的DNA解离下来，从而实现DNA的快速抽提纯化。该方法不需用酚/氯仿抽提法除去核酸溶液中的蛋白质，简化了步骤，提高了效率，同时免去酚/氯仿对环境的污染和对人体的毒害作用；该方法为基因转导、突变检测、基因诊断和治疗等研究和应用中DNA的纯化提供了一种新手段。 |
| 国际公布 |
