| 公开(公告)号 | CN1229389C |
| 公开(公告)日 | 2005.11.30 |
| 申请(专利)号 | CN03144274.9 |
| 申请日期 | 2003.09.15 |
| 专利名称 | 纯化基因工程重组干扰素的免疫磁性分离技术 |
| 主分类号 | C07K14/555 |
| 分类号 | C07K14/555;C07K1/14 |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 南开大学 |
| 发明(设计)人 | 白 钢;杨文博;陈家琪;曹 宇;曹学琳;张 磊 |
| 地址 | 300071天津市卫津路94号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 天津市学苑有限责任专利代理事务所 |
| 代理人 | 解松凡 |
| 国省代码 | 天津;12 |
| 主权项 | 一种纯化基因工程重组干扰素的免疫磁性分离技术，它包括磁性微球的制备、磁性微球的活化、磁性微球的致敏和发酵菌体裂解液中基因工程重组干扰素的分离纯化过程；其特征在于：磁性微球的制备是表面含有羟基活性基团的磁性微球，包括反相悬浮包埋法制备的琼脂糖磁性微球、纤维素磁性微球，和反相悬浮交联法制备的聚乙烯醇磁性微球，制备工艺包括下述过程：1)磁流体的制备：取FeCl2·4H2O溶于去离子水中，经微孔滤膜过滤除杂质，然后加入一定量的聚乙二醇和双氧水，混匀后用NaOH溶液调至pH9～11，在50～80℃水浴中反应3～6小时，得到棕黑色磁性胶体粒子的稳定悬浮液即磁流体；2)琼脂糖磁性微球的制备：在容器中加入甲苯，四氯化碳以及Span-80，预热至50～80℃，作为有机相；将一定量的磁流体加入到琼脂糖溶液中，于60～100℃水浴中加热溶解，并迅速转移至有机相中，快速搅拌后，迅速冷却至室温；最后用乙醚、蒸馏水清洗，经筛分处理后，于2～8℃保存备用；3)聚乙烯醇磁性微球的制备：在容器中加入汽油、四氯化碳以及Span-80混匀，作为有机相；用蒸馏水配制5～20％的聚乙烯醇溶液，加入一定量的磁流体，冰浴5～20分钟，加入戊二醛溶液和1NHCl，混匀后迅速倒入有机相中，充分搅拌后，缓慢升温至60～80℃再继续反应1～5小时；最后用乙醚、蒸馏水淋洗，经筛分处理后，于2～8℃保存备用；4)纤维素磁性微球的制备：在一定量的纤维素材料中加入10～30％NaOH溶液，浸泡1～4小时，挤去碱液，10～50℃下老化，加入一定量的二硫化碳混匀，密封，10～50℃后继续反应2～10小时，再加入2～20％NaOH溶液，10～50℃振荡反应2～10小时，得到橙红色的黄原酸酯粘胶液；在容器中加入氯苯、四氯化碳和油酸钾，10～50℃水浴，搅拌混匀后，加入一定量溶有磁流体的黄原酸酯粘胶液，充分搅拌后，升温至75～100℃，再继续反应1～4小时；最后用乙醚、蒸馏水淋洗，经筛分处理后，于2～8℃保存备用。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种基因工程重组蛋白的分离技术，特别是利用免疫磁性分离技术分离纯化基因工程重组干扰素(interferon，IFN)，属于生物技术领域。本发明采用不同材料制备含有羟基的磁性微球，经环氧氯丙烷活化后，导入活性氨基，用戊二醛作为连接臂与抗干扰素抗体连接，即得到可用于干扰素分离纯化的免疫磁性微球。用该免疫磁性微球和磁性分离装置对基因工程重组干扰素的发酵菌体裂解液进行分离纯化，活性回收率超过50％，纯化后的干扰素比活性高于1.0×108IU/mg，SDS-PAGE凝胶电泳分析纯度接近100％。 |
| 国际公布 |
