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公开(公告)号
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CN1250737C
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公开(公告)日
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2006.04.12
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申请(专利)号
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CN200310106227.6
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申请日期
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2003.11.07
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专利名称
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含CpG DNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法
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主分类号
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C12P19/34(2006.01)I
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分类号
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C12P19/34(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;A61K39/39(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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深圳市未来海洋科技发展有限公司
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发明(设计)人
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朱鸿飞;李光富
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地址
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210096广东省深圳市中心区福中一路江苏大厦30楼45号信箱
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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南京经纬专利商标代理有限公司
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代理人
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王之梓
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国省代码
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广东;44
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主权项
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一种能提高畜禽疫苗效价的含CpGDNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法，其特征在于：第一步：该基因工程重组质粒是按如下步骤制备的，按照5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3’、5’-GGTGCGTCGATGCAGGGGGG-3’及5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’串联而成的目的DNA序列，合成其正链和负链，在合成的寡核苷酸末端加上能与线形载体末端相匹配的碱基序列，然后将如此得到的寡核苷酸片段、退火缓冲液及无菌重蒸水混合后，于90℃～100℃水浴中孵浴3分钟以上，自然冷却至室温，将由此形成的一个或多个这样的双链DNA片段插入线性载体的相应的酶切位点，最后，将其转化感受态大肠杆菌而得到的基因工程重组质粒。第二步：根据目的片段两端的重组质粒DNA序列，设计特异引物。第三步：以重组质粒为模板，加入特异引物，并进行三温循环的PCR扩增，具体参数为：92℃～98℃预变性5～10分钟；92℃～98℃，45～60秒，50～58℃，45～60秒，72℃，45～60秒，进行30～35个循环；最后在72℃延伸10分钟。
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摘要
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含CpG DNA畜禽疫苗佐剂的PCR制备方法，据由序列为：5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3’、5’-GGTGCGTCGATGCAGGGGGG-3’及5’-TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3’串联而成的D19D282006 DNA片段的序列，合成其正链和负链，在合成的寡核苷酸末端加能与载体末端匹配的碱基，将此寡核苷酸片段、退火缓冲液、无菌重蒸水混合后，于90℃～100℃水浴中3分钟以上，冷却至室温，形成含CpG基序的目的片段，将DNA片段插入载体相应的酶切位点，并将其转化感受态大肠杆菌得到重组质粒；据目的片段两端的重组质粒DNA序列，设计特异引物；以重组质粒为模板，加入特异引物，进行三温循环PCR扩增，具体参数为：92℃～98℃预变性5～10分钟；92℃～98℃，45～60秒，50～58℃，45～60秒，72℃，45～60秒，进行30～35个循环；最后在72℃延伸10分钟。
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国际公布
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