单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法

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公开(公告)号	CN1246482C
公开(公告)日	2006.03.22
申请(专利)号	CN200410024074.5
申请日期	2004.05.08
专利名称	单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法
主分类号	C12Q1/68(2006.01)I
分类号	C12Q1/68(2006.01)I
分案原申请号
优先权
申请(专利权)人	山东大学齐鲁医院
发明(设计)人	邹雄;张义;杨晓静
地址	250012山东省济南市历下区文化西路107号
颁证日
国际申请
进入国家日期
专利代理机构	山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司
代理人	宋永丽
国省代码	山东;37
主权项	单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法，首先抽取外周血，提取淋巴细胞，然后对淋巴细胞总RNA进行鉴定，当可见5s，18s，28s，三条清晰条带，可用于逆转录聚合酶链反应，其特征在于：使逆转录聚合酶链反应体系为25微升，其中逆转录酶1微升，随机引物1微升，Taq酶0.2微升，上下游引物是0.4微升，其中HLA-B和HLA-A引物均是4对，使用其中任何一对均可，HLA-B引物是：上游引物5′-CACACTGACCTGGCAGCGGGAT-3′，下游引物：5′-AGAGCCCTGGGCACTGTCGCT-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-GGGCAGCTGTGGTGCCT-3′，下游引物是5′-CACTGTCGCTGCACGCAGCCT-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-CTGCCGAAGCCCCTCACCCTCT-3′，下游引物是5′-AGGACCAGACCCAGGACA-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-GCCGTCTTCCCAGTCCACCGT-3′，下游引物是5′-ATGCCCACGATGGGGACGGT-3′，HLA-A引物是：上游引物5′CTACCCTGCGGAGATCAC-3′，下游引物：5′-AGAGAACCAGGCCAGCAAT-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-ATGAGGCGGAGCAGTTGA-3′，下游引物5′-ATGGTGGGCTGGGAAGAC-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-GAGGCGGAGCAGTTGAGA-3′，下游引物5′-GGAAGGGCAGGAACAACTC-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-GGAGGACCAGACCCAGGACA-3′，下游引物5’-ATGGTGGGCTGGGAAGAC-3’，其中RNA是10微升，得出多聚酶链反应参数是42℃30min，95℃3min，94℃1min，55℃1min，72℃1min，5个循环，94℃10sec，60℃40sec，40个循环，72℃5min，对扩增产物电泳扫描及序列分析，最后进行荧光定量检测，以引物为基础合成荧光探针，建立荧光定量逆转录聚合酶链反应，获得检测结果。
摘要	本发明是单个核细胞白细胞相容性抗原A和B特异核糖核酸检测方法，一、外周血淋巴细胞(PBL)的提取，二、外周血淋巴细胞总RNA的鉴定，三、优化后的聚合酶链反应(PCR)扩增体系，四、扩增产物的电泳扫描及序列分析，五、荧光定量检测。采用本发明检测方法，检测结果是用1-2％琼脂糖凝胶电泳，正常人在287bp处可见明显亮带，免疫力低的人群则明显减弱或缺失，以此结果，可以判断是否是肿瘤患者，若是肿瘤患者筛选生物治疗的药物或治疗方法，可以提高肿瘤患者针对性的治疗效果，对尚未有临床症状的人群，提供应当增强免疫力的警示，对研究人员可以提供寻求提高细胞免疫力的中草药等。本发明可以普遍应用于健康查体。
国际公布