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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法

公开(公告)号 CN1749274A  
公开(公告)日 2006.03.22  
申请(专利)号 CN200510080478.0  
申请日期 2005.07.05  
专利名称 一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法  
主分类号 C07K14/56(2006.01)I  
分类号 C07K14/56(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 北京凯因生物技术有限公司  
发明(设计)人 张春丽  
地址 100176北京市经济技术开发区荣京东街6号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构  
代理人  
国省代码 北京;11  
主权项 一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法,其包括下述步骤:(1)破碎发酵完毕的重组人干扰素α2b大肠杆菌工程菌,离心得沉淀;(2)将沉淀按1∶5-20(重量/体积)比例加入4M尿素/TE溶液,离心得沉淀;(3)将沉淀按1∶5-25(重量/体积)比例加入Tris-HCl溶液,离心得沉淀;(4)将沉淀按1∶2-10(重量/体积)加入8M盐酸胍+DTT裂解液,离心,取上清液,测蛋白含量;(5)将上清液倒入H3BO3溶液中搅拌均匀,稀释后的溶液蛋白含量为0.15-0.08mg/ml,复性,得复性液;(6)向复性液中缓慢滴加6MHCl,调PH2.0-3.0,离心,收集上清液,缓慢滴加6MNaOH(体积/体积),调PH7.8-8.0;(7)将硫酸铵粉末缓慢加入上清液中,溶解后过滤,取滤液;(8)依次进行疏水柱M1柱层析、CM-Sepharose柱层析、疏水柱M2柱层析和S-100分子筛层析。  
摘要 本发明涉及一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法,其包括下述步骤:破碎重组人干扰素α2b大肠杆菌工程菌,尿素溶解,Tris-HCl洗涤,盐酸胍裂解,硼酸复性,调pH值,盐溶,疏水柱M 1柱层析,CM-Sepharose柱层析,疏水柱M2柱层析和S-100分子筛层析。本方法减少了纯化步骤,进行纯化过程的集成,使工艺流程顺畅,无迂回,生产配置无瓶颈,为大规模自动化生产的再放大提供了可能。  
国际公布  
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