| 公开(公告)号 | CN1238498C |
| 公开(公告)日 | 2006.01.25 |
| 申请(专利)号 | CN200410025862.6 |
| 申请日期 | 2004.02.12 |
| 专利名称 | 动物细胞无血清悬浮培养工艺过程控制参数的方法 |
| 主分类号 | C12N5/16(2006.01)I |
| 分类号 | C12N5/16(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 陈志南 |
| 发明(设计)人 | 米 力;冯 强;李 玲;王贤辉 |
| 地址 | 710032陕西省西安市长乐西路17号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 李郑建 |
| 国省代码 | 陕西;61 |
| 主权项 | 一种动物细胞无血清悬浮培养工艺过程控制参数的方法，动物细胞包括杂交瘤或CHO或SP2/0或NSO工程细胞，这些细胞分泌表达重组蛋白治疗药物；培养工艺控制流加浓缩的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等营养物的速率，结合灌流无血清基础培养基，降低有害毒附产物的浓度；其特征在于，包括以下步骤：1)用机械搅拌式生物反应器无血清悬浮培养动物细胞，起始接种细胞密度为1×105～3×105细胞/ml；培养环境维持在温度36℃-37℃，pH值为6.5-7.4，搅拌速度40-80转/分、溶氧浓度40％～80％；2)培养过程中的参数主要针对特定细胞生长代谢需求，设定谷氨酰胺、葡萄糖、氨、乳酸的上/下限浓度指标，控制流加浓缩的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等营养物的速率；过程控制的参数包括：a.无血清培养基起始谷氨酰胺的浓度为2.0～3.5mM；b.无血清培养基起始葡萄糖的浓度为0～5g/L；c.培养过程中，谷氨酰胺的最低下限为0.1～0.3mM；d.培养过程中，葡萄糖的最低下限为0.25～0.5g/L；e.培养过程中，氨离子的最高上限为2～4mM；f.培养过程中，乳酸的最高上限为15～25mM；g.培养过程中，通过氧气摄入率的变化，即时监测反应细胞生长状态；h.培养过程细胞的氧气摄入率在0.10×10-12～0.15×10-12mol/细胞/h；当该值小于0.07×10-12mol/细胞/h，需改变流加速率或灌流速率，或调整培养环境；i.当培养液中谷氨酰胺、葡萄糖浓度低于下限时，开始流加浓缩营养物；当培养液中氨和乳酸的浓度高于上限时，开始灌流无血清基础培养基，灌流速率为0.3-0day1；3)培养过程细胞由对数生长期进入平稳期并维持较长时间，其产物浓度逐渐升高，当细胞群体生长处于衰退期且产物浓度不再持续增加时停止培养。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种动物细胞无血清悬浮培养生产重组蛋白治疗药物的工艺过程控制参数方法，该工艺采用流加浓缩的能源物质和氨基酸，结合灌流基础培养基的方法。过程控制参数主要针对特定细胞生长代谢需求，设定谷氨酰胺、葡萄糖、氨、乳酸的上/下限浓度指标，控制流加浓缩的谷氨酰胺、葡萄糖和氨基酸等营养物的速率，结合灌流无血清基础培养基降低代谢产物浓度的方法；采用氧气摄入率即时监测反应细胞生长状态；用计算机程控补料系统精确控制流加速率；该工艺特别适宜杂交瘤细胞的大规模培养生产治疗用抗体，具有稳定性好、可控性强、过程控制指标明确、可操作性强、批次间结果差异小，等特点。 |
| 国际公布 |
