利用三环葵烷-9-基-二硫代碳酸酯钾盐诱导血管内皮细胞向神经元分化的方法
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公开(公告)号
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CN1238497C
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公开(公告)日
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2006.01.25
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申请(专利)号
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CN200410023498.X
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申请日期
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2004.02.25
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专利名称
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利用三环葵烷-9-基-二硫代碳酸酯钾盐诱导血管内皮细胞向神经元分化的方法
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主分类号
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C12N5/08(2006.01)I
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分类号
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C12N5/08(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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山东大学
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发明(设计)人
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苗俊英;张尚立;王 楠
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地址
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250100山东省济南市历下区山大南路27号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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济南三达专利事务所
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代理人
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孙 君
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国省代码
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山东;37
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主权项
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一种利用D609诱导血管内皮细胞向神经元分化的方法，由以下步骤组成：1)选取处于对数生长期的血管内皮细胞，接种于培养板各孔中的铺有明胶的盖玻片上，置于饱和湿度、5％的CO2、37℃培养箱内，在含有10％小牛血清和40μg/LbFGF的M199培养液中培养，至细胞生长达到盖玻片面积的80％～90％；2)用无血清培养液将上述培养板各孔中的细胞清洗1～2次，然后对培养板各孔中的细胞进行分组，确定对照组和诱导实验组，每组不少于4孔；3)对照组的血管内皮细胞培养液采用去除血清和和bFGF的M199培养基，诱导实验组的细胞培养液除使用对照组培养液外还添加了浓度为5mg/L～30mg/L的D609；4)分别调整上述对照组和诱导实验组血管内皮细胞的pH值，使pH为7.2，置于饱和湿度、5％的CO2、37℃培养箱培养20～30分钟；5)将步骤4)中对照组和诱导实验组血管内皮细胞pH调为7.4-7.8，置于饱和湿度、5％的CO2培养箱37℃培养，诱导6～11小时，检测诱导结果。
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摘要
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本发明公开了一种利用D609诱导血管内皮细胞向神经元分化的方法，该方法由血管内皮细胞接种培养；无血清培养液清洗；对照组和诱导实验组血管内皮细胞在pH为7.2条件下预诱导；在浓度为5mg/L～30mg/L的D609，pH7.4-7.8，饱和湿度、5％的CO2，37℃条件下诱导以及维持诱导等步骤组成。本发明方法证明了血管内皮细胞也具有多分化的潜能性，这为细胞的定向诱导分化提供了新的理论和实验依据，也为利用D609使其作为诱导剂诱导细胞分化开辟了新用途。
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国际公布
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