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公开(公告)号
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CN1238381C
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公开(公告)日
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2006.01.25
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申请(专利)号
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CN200310106256.2
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申请日期
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2003.11.08
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专利名称
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抗肿瘤表面抗原p185单抗嵌合抗体及其制备方法
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主分类号
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C07K16/18(2006.01)I
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分类号
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C07K16/18(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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中国科学技术大学
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发明(设计)人
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刘 兢;程联胜
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地址
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230026安徽省合肥市金寨路96号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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合肥华信专利商标事务所
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代理人
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余成俊
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国省代码
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安徽;34
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主权项
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一种抗肿瘤表面抗原p185单链抗体-人scFv-Fc嵌合抗体，分子中包括两个由单链抗体组成的两个抗原结合区和两条人抗体IgG1分子恒定区通过三对二硫键连接在一起的Fc片段；其特征在于：1)该嵌合抗体分子仅由两条相同的重组单链组成，每条重组单链有一个抗原结合区，它是由重链和轻链可变区共价连接在一起，构成识别抗原的单链抗体，命名为A21scFv；2)该单链抗体A21scFv的氨基酸序列为：VLDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYLinkerPWTFGGGTKLEIKRGGGGSGVHGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSS其中的黑体部分为重链和轻链的抗原结合区，下划线部分为重链和轻链可变区之间的连接区；每条单链scFv片段与人抗体IgG1的Fc片段之间是通过肽键共价连接构成了一条scFv-Fc嵌合单链，嵌合单链中scFv与Fc的连接区有一段称作绞链区的肽段部分含有三对共价的链间二硫键；即这个分子是由两条嵌合单链通过三对链间二硫键连接组成的同二聚体的嵌合抗体分子。
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摘要
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本发明针对肿瘤表面抗原p185的单链抗体-人scFv-Fc嵌合抗体及其制备方法，特征是采用表面表位包埋法免疫后制备的杂交瘤细胞株，以单链嵌合抗体基因的形式转染哺乳动物细胞CHO，采用pEE14作为重组抗体的载体，用它携带基因转染到GS低表达的哺乳动物细胞CHO中，将高表达重组抗体的CHO细胞株筛选出来；本发明的嵌合抗体分子仅由两条相同的重组单链组成，每条重组单链有一的抗原结合区，由重链和轻链可变区共价连接在一起，构成了识别抗原的单链抗体；由于去除了轻链恒定区和重链恒定区的CH1结构域，比完整抗体的分子量小了近三分之一，既更容易透过血管系屏障渗透进实体瘤的内部，又不像小的蛋白多肽药物那样容易很快被降解，从而能更好地发挥抑制肿瘤生长的作用。
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国际公布
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