公开(公告)号 | CN1236055C |
公开(公告)日 | 2006.01.11 |
申请(专利)号 | CN03130264.5 |
申请日期 | 2003.06.27 |
专利名称 | 高转移倾向的人乳腺癌细胞系及其建立方法 |
主分类号 | C12N5/00(2006.01)I |
分类号 | C12N5/00(2006.01)I |
分案原申请号 | |
优先权 | |
申请(专利权)人 | 南开大学 |
发明(设计)人 | 叶丽虹;张晓东;朱惠芳;吴莲英;鞠永健 |
地址 | 300071天津市卫津路94号 |
颁证日 | |
国际申请 | |
进入国家日期 | |
专利代理机构 | 天津市学苑有限责任专利代理事务所 |
代理人 | 解松凡 |
国省代码 | 天津;12 |
主权项 | 一种高转移倾向人乳腺癌细胞系LM-MCF-7,其特征是用下述方法建立的:1)接种SCID鼠:取乳腺癌亲本MCF-7细胞悬液皮下接种于SCID小鼠肩部,所述细胞悬液的浓度为5×107/0.2ml;2)确认转移部位:将SCID鼠处死,对各个组织的病理切片进行显微镜下观察,确立其转移灶的部位为肺脏、脾脏、骨髓和淋巴结;3)高转移倾向的人乳腺癌细胞系的获得:接种MCF-7细胞68天后,将SCID鼠处死,取出肺脏,进行原代培养,采用下列步骤:用加有双抗的Hank’s液漂洗组织块5分钟;使用剪刀剪碎组织,去除血液、脂肪、神经组织、结缔组织和坏死组织;将肺组织剪切成1mm3左右小块;将剪切好的小块用眼科镊送入培养瓶,用接种针将其均匀摆置,间隔0.5cm;组织块放好后,轻轻将培养瓶翻转,让瓶底朝上,盖好瓶盖,放置在37℃CO2培养箱内;放置3小时,将培养瓶慢慢翻转平放,向瓶内注入10mlRPMI1640培养液,所述培养液含20%血清,静置培养;原代培养每3天换液一次,去除已漂浮的组织块和残留的血细胞;当由组织块中长出的细胞能够长满培养瓶底部后,进行细胞传代,具体步骤如下:向瓶中加入1-2ml消化液,室温3分钟后,观察到细胞质回缩、细胞间隙增大,吸除消化液,加入PBS将培养瓶残留的消化液洗掉;用吸管吸去瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,使之脱离瓶壁形成细胞悬液,计数,分别接种新的培养瓶,当细胞传代到第三代,将原代培养时用的20%胎牛血清降为10%;来源于该肺组织的原代培养传代的细胞呈现上皮样,细胞形态均一,无接触抑制,并且生长十分迅速,两天就能长满瓶底,需要传代,该细胞系进行了100代以上的培养,该细胞系即为LM-MCF-7;4)LM-MCF-7细胞体内成瘤:当LM-MCF-7细胞体外培养20代后,将瘤细胞再回注到SCID鼠皮下,方法同前;成瘤率达到100%,并且在SCID鼠的肺脏、肾脏、脾脏、骨髓、淋巴结和心脏出现广泛转移。 |
摘要 | 本发明涉及癌细胞系,特别是一种高转移倾向的人乳腺癌细胞系及其建立的方法,属动物细胞系领域。有关肿瘤的侵袭与移转的机制目前尚不十分清楚。需要建立肿瘤转移动物模型对其进行深入的研究。以往在肿瘤转移动物模型中应用裸鼠,在本发明中,我们采用SCID小鼠作为实验对象,取乳腺癌亲本MCF-7细胞悬液(5×107/0.2ml)皮下接种于SCID小鼠肩部,接种MCF-7细胞68天后,将SCID鼠处死,取出肺脏,进行原代培养,当由组织块中长出的细胞能够长满培养瓶底部后,进行细胞传代,将该细胞命名为LM-MCF-7。当LM-MCF-7细胞体外培养20代后,将瘤细胞再回注到SCID鼠皮下,方法同前;成瘤率达到100%(5/5只),并且在SCID鼠的肺脏、肾脏、脾脏、骨髓、淋巴结和心脏等脏器出现广泛转移。 |
国际公布 |