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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:高转移倾向的人乳腺癌细胞系及其建立方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

高转移倾向的人乳腺癌细胞系及其建立方法

公开(公告)号 CN1236055C  
公开(公告)日 2006.01.11  
申请(专利)号 CN03130264.5  
申请日期 2003.06.27  
专利名称 高转移倾向的人乳腺癌细胞系及其建立方法  
主分类号 C12N5/00(2006.01)I  
分类号 C12N5/00(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 南开大学  
发明(设计)人 叶丽虹;张晓东;朱惠芳;吴英;鞠永健  
地址 300071天津市卫津路94号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 天津市学苑有限责任专利代理事务所  
代理人 解松凡  
国省代码 天津;12  
主权项 一种高转移倾向人乳腺癌细胞系LM-MCF-7,其特征是用下述方法建立的:1)接种SCID:取乳腺癌亲本MCF-7细胞悬液皮下接种于SCID小鼠肩部,所述细胞悬液的浓度为5×107/0.2ml;2)确认转移部位:将SCID鼠处死,对各个组织的病理切片进行显微镜下观察,确立其转移灶的部位为脏、脾脏、骨髓和淋巴结;3)高转移倾向的人乳腺癌细胞系的获得:接种MCF-7细胞68天后,将SCID鼠处死,取出肺脏,进行原代培养,采用下列步骤:用加有双抗的Hank’s液漂洗组织块5分钟;使用剪刀剪碎组织,去除血液、脂肪、神经组织、结缔组织和坏死组织;将肺组织剪切成1mm3左右小块;将剪切好的小块用眼科镊送入培养瓶,用接种针将其均匀摆置,间隔0.5cm;组织块放好后,轻轻将培养瓶翻转,让瓶底朝上,盖好瓶盖,放置在37℃CO2培养箱内;放置3小时,将培养瓶慢慢翻转平放,向瓶内注入10mlRPMI1640培养液,所述培养液含20%血清,静置培养;原代培养每3天换液一次,去除已漂浮的组织块和残留的血细胞;当由组织块中长出的细胞能够长满培养瓶底部后,进行细胞传代,具体步骤如下:向瓶中加入1-2ml消化液,室温3分钟后,观察到细胞质回缩、细胞间隙增大,吸除消化液,加入PBS将培养瓶残留的消化液洗掉;用吸管吸去瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,使之脱离瓶壁形成细胞悬液,计数,分别接种新的培养瓶,当细胞传代到第三代,将原代培养时用的20%胎牛血清降为10%;来源于该肺组织的原代培养传代的细胞呈现上皮样,细胞形态均一,无接触抑制,并且生长十分迅速,两天就能长满瓶底,需要传代,该细胞系进行了100代以上的培养,该细胞系即为LM-MCF-7;4)LM-MCF-7细胞体内成瘤:当LM-MCF-7细胞体外培养20代后,将瘤细胞再回注到SCID鼠皮下,方法同前;成瘤率达到100%,并且在SCID鼠的肺脏、肾脏、脾脏、骨髓、淋巴结和心脏出现广泛转移。  
摘要 本发明涉及癌细胞系,特别是一种高转移倾向的人乳腺癌细胞系及其建立的方法,属动物细胞系领域。有关肿瘤的侵袭与移转的机制目前尚不十分清楚。需要建立肿瘤转移动物模型对其进行深入的研究。以往在肿瘤转移动物模型中应用裸鼠,在本发明中,我们采用SCID小鼠作为实验对,取乳腺癌亲本MCF-7细胞悬液(5×107/0.2ml)皮下接种于SCID小鼠肩部,接种MCF-7细胞68天后,将SCID鼠处死,取出肺脏,进行原代培养,当由组织块中长出的细胞能够长满培养瓶底部后,进行细胞传代,将该细胞命名为LM-MCF-7。当LM-MCF-7细胞体外培养20代后,将瘤细胞再回注到SCID鼠皮下,方法同前;成瘤率达到100%(5/5只),并且在SCID鼠的肺脏、肾脏、脾脏、骨髓、淋巴结和心脏等脏器出现广泛转移。  
国际公布  
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