| 公开(公告)号 | CN1234725C |
| 公开(公告)日 | 2006.01.04 |
| 申请(专利)号 | CN200410026022.1 |
| 申请日期 | 2004.04.07 |
| 专利名称 | 一种高效快速纯化制备片段抗体的方法 |
| 主分类号 | C07K1/16(2006.01)I |
| 分类号 | C07K1/16(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;C12P21/06(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 陈志南 |
| 发明(设计)人 | 米 力;唐 浩;余晓玲;谢 丽 |
| 地址 | 710032陕西省西安市长乐西路17号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 李郑建 |
| 国省代码 | 陕西;61 |
| 主权项 | 一种高效快速纯化制备片段抗体的方法，其特征在于，采用扩张柱床吸附——阴离子层析浓缩——疏水层析纯化三步纯化，从细胞规模培养物中分离纯化抗体IgG，酶切后纯化制备片段抗体，整个纯化工艺的衔接采用同一缓冲系统，通过改变pH值的方法进行洗脱，减少了工艺过程缓冲系统置换的步骤，该方法的步骤为：(1)动物细胞规模培养物中分离纯化抗体IgG，先用StreamlineSP阳离子层析吸附动物细胞规模培养物中的抗体IgG，得到初步纯化的抗体IgG，其过程参数为：a.StreamlineSP阳离子层析，动物细胞培养物无须澄清和浓缩，用超纯水稀释至电导率为4ms/cm～6ms/cm，吸附条件用缓冲系统A，直接上样；b.解吸附条件用缓冲系统B，直接洗脱，收集洗脱峰；(2)阴离子层析，抗体IgG被充分浓缩纯化；胃蛋白酶酶切获取F(ab’)2片段；其过程参数为：a.吸附条件用缓冲系统B，阳离子层析洗脱峰直接上样；解吸附条件用缓冲系统A，收集洗脱峰，进一步浓缩纯化抗体IgG；b.酶切用缓冲系统A，酶与抗体按重量比1∶100混合，37℃水浴反应0.5h-2h，调整pH＝6-8终止反应；(3)疏水层析纯化片段抗体，其过程参数为：a.吸附条件用缓冲系统A加入0.8-5M硫酸铵，酶切后的样品同样加入0.8-5M硫酸铵，调节pH值＝3-6，上样；b.解吸附条件用缓冲系统A梯度洗脱，收集洗脱峰；上述缓冲系统A为羧基酸缓冲系统，pH＝3-6，浓度0.01-0.1M；缓冲系统B为单价的阳离子或多碱基的阴离子缓冲系统，pH＝7-9，浓度0.01-0.05M。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种从动物细胞规模培养物中高效快速纯化制备片段抗体的方法，采用扩张柱床吸附、阴离子层析浓缩、疏水层析纯化方法，扩张柱床阳离子层析吸附大规模细胞培养物中的抗体IgG，通过改变缓冲系统pH值进行洗脱；收集的洗脱峰即可直接进行阴离子层析；被充分浓缩纯化的抗体IgG，直接被胃蛋白酶酶切获取片段抗体，进行疏水层析纯化，最终获取的片段抗体纯度不小于97％，整个纯化过程在12小时内即可完成。纯化工艺的衔接采用同一缓冲系统，通过改变pH值的方法进行洗脱，省去了缓冲系统更换步骤，使前后纯化过程衔接紧密；通过阳离子——阴离子色谱结合的浓缩方法替代传统的硫酸铵沉淀浓缩方法。具有高效、快速、成本低、纯度高、稳定、批次间结果差异小等特点。 |
| 国际公布 |
